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结核分枝杆菌inhA基因突变的研究
目的了解我国结核分枝杆菌耐异烟肼(INH)临床分离株inhA基因突变情况,探讨快速检测结核分枝杆菌耐药基因型的分子药敏检测方法.方法用PCR单链构象多态性(PCR-SSCP)和PCR直接测序法(PCR-DS)分析30株结核分枝杆菌临床分离株inhA基因.结果以结核分枝杆菌H37Rv标准株对照观察所有INH敏感株的PCR-SSCP和PCR-DS图谱,均未发现inhA基因突变;在12株INH耐药株中,有5株无PCR-SSCP和PCR-DS图谱异常,占INH耐药株的41.7%,另有5株和2株分别发生核苷酸错义突变和同义突变,共占INH耐药株的58.3%.结论多数结核分枝杆菌耐1NH与inhA基因突变密切相关,但检测inhA基因突变不宜作为临床分离株耐药性的快速检测指标.
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PCR-SSCP检测白血病患者C/EBPξ基因突变方法学建立
目的 建立一种快速、批量筛查白血病患者骨髓C/EBPξ基因外显子突变的多聚酶链反应-单链构象多态性(PCRSSCP)分析方法 方法 用Bio-Rad iCycler梯度PCR仪对25 μL PCR反应体系中的Mg++、Taq酶等浓度及反应条件进行优化,并用2％琼脂糖电泳检验产物质量.在此基础上,再对中性聚丙烯酰胺凝胶浓度、上样缓冲液种类、上样量、上样次数及相隔时间、PCR产物稀释倍数、电压、电泳温度等因素进行探讨.同时比较80个健康体检者外周血与20个胸外科良恶性肿瘤患者肋骨骨髓DNA的PCR-SSCP图谱.结果 25μL PCR反应体系中的Mg++、Taq酶浓度分别为1.5～2.0mM和1.0～1.5U,退火温度为54 ℃～57℃时PCR扩增效率高;应用8％～10％非变性聚丙烯酰胺凝胶,低离子强度(LIS)上样缓冲液,PCR产物稀释4～5倍,上样量为5～10μL,同一块凝胶相隔0.5～1.0小时可上样2次产物,电压为320V挂冰,室温或4℃电泳5～7小时,SSCP分析可得到较为满意的图谱.80例健康体检者外周血与20例正常肋骨骨髓DNA的C/EBPξ基因图谱相同.结论 可以用正常体检者外周血DNA代替正常肋骨骨髓DNA行SSCP分析,作为C/EBPξ基因突变检测的对照图谱,两次上样的PCR-SSCP方法节约了试剂、时间、人力,可用于快速大量筛查白血病患者C/EBPξ基因突变.
关键词： C/EBPξ基因突变 PCR SSCP 白血病
