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奈瑟氏淋球菌外膜蛋白PIA基因的克隆、真核表达与鉴定
目的 克隆奈瑟氏淋球菌外膜蛋白PIA基因,构建稳定的真核重组表达载体,并在HELA细胞中表达.方法 根据淋球菌PIA基因序列,利用Primer Premier5.0生物学软件设计一对特异性扩增引物,以淋球菌国际标准株基因组DNA为模板,PCR扩增除掉信号肽后PIA基因开放读码框(ORF),将其插入真核表达载体pcDNA3.1(+),构建含目的基因的pcDNA3.1(+)/PIA重组质粒,PCR及酶切鉴定重组载体,脂质体转染HELA细胞,以间接免疫荧光法检测PIA基因在HELA细胞中的表达. 结果 成功构建了pcDNA3.1(+)/PIA重组质粒;pcDNA3.1(+)/PIA能在HELA细胞中高效表达PIA蛋白. 结论 重组质粒pcDNA3.1(+)/PIA构建成功并在HELA细胞中高效表达了PIA蛋白,为该蛋白的抗原性及功能学研究奠定了基础.
关键词： 奈瑟氏淋球菌 PIA pcDNA3.1(+)/PIA 表达
