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免疫荧光法检测奈瑟氏淋球菌方法的建立及其临床应用评价
通过试验研究,确定了抗体荧光标记的佳条件、免疫荧光法检测的适抗体浓度及佳反应条件,从而研究免疫荧光法检测奈瑟氏淋球菌方法的建立,并对奈瑟氏淋球菌免疫荧光法检测试剂盒进行临床试验,评价其检测效果.采用分离培养法和奈瑟氏淋球菌免疫荧光法检测试剂盒对1100例临床样本进行平行检测,并以分离培养法检测结果为对照,统计免疫荧光试剂盒与分离培养法检测结果的总符合率及阴、阳性符合率.试验结果统计分析显示,受测免疫荧光试剂盒检测与分离培养法检测的总符合率为97.64%,阳性符合率为93.28%,阴性符合率为98.17%,Kappa值＞0.8,表明受测免疫荧光试剂盒与分离培养法的临床检测结果无显著性差异.受测免疫荧光法检测试剂盒检测快速、简便、经济、准确,可用于奈瑟氏淋球菌的临床快速诊断.
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广州地区淋球菌对环丙沙星耐药的监测与分析
目的为了解广州地区1998～2002年淋球菌对环丙沙星敏感性和耐药性的变迁.方法采用琼脂稀释法测定环丙沙星对每年分离的淋球菌的低抑菌浓度(MIC).结果对1998～2002年在广州市性病监测中心就诊的性病患者中分离到的603株淋球菌,进行耐药性分析,环丙沙星的敏感率由1998年的12%降至2002年的零敏感,而耐药率由1998年的56.5%上升至2002年的98%.结论广州地区流行的淋球菌的耐药情况日趋严重,喹诺酮类药物的高耐药率表明已不再适宜被推荐为治疗淋病的一线药物.有必要持续监测淋球菌的耐药性,并减少抗菌药物的滥用,以保证药物的敏感性.
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广州地区奈瑟氏淋球菌对头孢妥仑耐药性的监测与分析
目的了解广州地区奈瑟氏淋球菌对头孢妥仑的药物敏感性和耐药性.方法采用琼脂稀释法测定头孢妥仑对分离的耐瑟氏淋球菌的低抑菌浓度(MIC).结果头孢妥仑的MIC90由1993年的0.125mg/L上升至2004年的0.5mg/L,其敏感度下降2个对倍稀释度,而同一时间其它抗菌药MIC值的变化则远远大于该监测数据.该研究中未发现对头孢妥仑的耐药菌株.结论目前广州地区流行的奈瑟氏淋球菌的耐药情况日趋严重,喹喏酮类药物的高度耐药率表明已不再适宜被推荐为治疗淋病的一线药物.头孢妥仑对奈瑟氏淋球菌仍然处于良好的敏感状态,推荐用于淋病的治疗有良好的临床疗效.但考虑到淋球菌对各种抗生素敏感度的变化,有必要监测奈瑟氏淋球菌的耐药性,减少抗菌药物的滥用,保证药物的敏感性.
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头孢呋辛钠治疗急性泌尿道感染的临床评价
头孢呋辛钠(Cefuroxine)是第二代头孢菌素，具有广谱抗菌活性，并对β-内酰胺酶稳定。对链球菌属如化脓性链球菌及肺炎链球菌、革兰氏阴性杆菌包括大肠杆菌、克雷伯氏菌属、嗜血流感杆菌、卡他莫拉氏菌、变形杆菌、沙门氏菌属、奈瑟氏淋球菌等均有较强的抗菌作用，对甲氧西林敏感的葡萄球菌的抗菌活性优于第三代头孢菌素。我科于2000年1月-6月期间，应用头孢呋辛钠(深圳)治疗急性泌尿道感染21例，并与西力欣(头孢呋辛钠，葛兰素)对照。观察其疗效与安全性，现总结如下。
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湛江地区淋球菌流行株质粒谱型的研究
为探讨淋球菌耐药谱与质粒谱之间的相互关系,对1998年～1999年广东省湛江地区分离鉴定出的98株淋球菌,以碱裂解法进行质粒的抽提,并分析质粒谱型的分布情况.结果显示98株淋球菌流行株,检出质粒的有90株,占91.84%;质粒谱型12种,以7.4kb+4.2kb,39.5kb+7.4kb+4.2kb为主,占38.76%.从而揭示湛江地区淋球菌流行株质粒的分布现状,为该地区淋病的分子流行病学研究打下了基础,但质粒谱与耐药性之间的关系尚有待进一步探讨.
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淋球菌多重耐药性与mtrR基因点突变的关系
目的探讨多传递耐药(mtr)外排系统中mtrR基因点突变与淋球菌流行株多重耐药性的关系.方法应用K-B 法和琼脂稀释法分离出55 株淋球菌流行株.利用小量细菌基因组DNA快速抽提试剂盒取淋球菌DNA,PCR 扩增16株淋球菌mtrR基因,并对扩增产物测序,比较淋球菌敏感株与多重耐药株的差异.结果淋球菌多重耐药株占76.36%(42/55).4 株敏感株和2 株耐青霉素淋球菌无mtrR基因突变,10 株多重耐药株均有mtrR基因点突变,表现为3种点突变形式:6株发生了第45位Gly(GGC→GAC)Asp, 3株发生了第14位His(CAC→CGC)Arg, 1株发生了第51位Phe(TTC→GTC)Val.结论淋球菌mtrR基因第45位Gly(GGC→GAC)Asp、14位His(CAC→CGC)Arg和第51位Phe(TTC→GTC)Val突变与淋球菌流行株的多重耐药性密切相关.
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淋球菌MtrR基因调控区删除突变与淋球菌耐药的关系
目的 分析淋球菌MtrR基因调控区删除突变与淋球菌耐药之间的关系.方法 以临床收集的淋菌株为出发株,用制备的突变MtrR DNA片段进行转染试验,筛选并纯化MtrR基因调控区9 bp片段删除的突变株,测定出发株和转染株对多种抗菌素的小抑菌浓度(MIC)值和MtrCDE基因转录量.结果 在18株临床株中,有15株被转染为目的 突变株,其余3株始终不能被转染.转染株与出发株相比,对Triton-100的MIC值平均提升28.64倍,对脂溶性抗生素红霉素和四环素的MIC值平均升高8.55倍和5.53倍,差异均有统计学意义(均P＜0.01);对氯霉素和链霉素的平均MIC值,两者差异无统计学意义(均P＞0.05).RT-PCR产物的凝胶电泳分析显示,所有转染株MtrCDE基因转录水平均有不同程度的升高,且与淋球菌对脂溶性抗菌试剂的耐药水平呈正相关.结论 转染株MtrR基因调控区9 bp片段的删除可通过阻断MtrR基因表达而提高MtrCDE基因的转录水平,从而诱导淋球菌耐药.
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奈瑟氏淋球菌外膜蛋白PIA基因的克隆、真核表达与鉴定
目的 克隆奈瑟氏淋球菌外膜蛋白PIA基因,构建稳定的真核重组表达载体,并在HELA细胞中表达.方法 根据淋球菌PIA基因序列,利用Primer Premier5.0生物学软件设计一对特异性扩增引物,以淋球菌国际标准株基因组DNA为模板,PCR扩增除掉信号肽后PIA基因开放读码框(ORF),将其插入真核表达载体pcDNA3.1(+),构建含目的基因的pcDNA3.1(+)/PIA重组质粒,PCR及酶切鉴定重组载体,脂质体转染HELA细胞,以间接免疫荧光法检测PIA基因在HELA细胞中的表达. 结果 成功构建了pcDNA3.1(+)/PIA重组质粒;pcDNA3.1(+)/PIA能在HELA细胞中高效表达PIA蛋白. 结论 重组质粒pcDNA3.1(+)/PIA构建成功并在HELA细胞中高效表达了PIA蛋白,为该蛋白的抗原性及功能学研究奠定了基础.
关键词： 奈瑟氏淋球菌 PIA pcDNA3.1(+)/PIA 表达 -
广州地区淋球菌对环丙沙星的耐药性监测
目的:监测广州地区2000年-2003年分离的淋球菌对环丙沙星的耐药性,为制定淋病防治策略和修改淋病的治疗方案提供参考依据.方法:采用琼脂稀释法测定菌株对环丙沙星的小抑菌浓度(MIC),计算耐药百分率、MIC50、MIC90和MIC均.结果:从2000年-2003年共检测396株淋球菌,耐药菌344株,占86.7%.淋球菌对环丙沙星耐药率由2001年的73.7%上升到2003年的93.6%,呈稳步上升趋势.环丙沙星的MIC50、MIC90和MIC均4年间增加了1倍.结论:广州地区淋球菌对环丙沙星耐药率很高,且呈稳步上升趋势,环丙沙星不再适宜被推荐用于对淋病治疗的首选药物.
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海南地区2011年四环素高度耐药淋球菌tetM基因分型
目的 了解海南地区四环素高度耐药淋球菌(TRNG)的分子流行病学情况.方法 采用琼脂稀释法检测TRNG菌株,PCR方法对TRNG菌株鉴定并进行tetM基因分型；纸片酸度法测定产β-内酰胺酶菌株(PPNG),PCR方法鉴定β-内酰胺酶质粒并行TEM-1基因分型.结果 2011年检测101株淋球菌,检出TRNG 54株(53.47％),其中22株(40.74％)对四环素和青霉素耐药；tetM基因分型结果显示52株为荷兰型,有2株为美国型.22株对四环素和青霉素耐药株的TEM-1基因分型21株为亚洲型,1株非洲型且合并美国型；未见多伦多型、里约型.结论 海南地区TRNG流行株以荷兰型tetM基因为主(96.30％),美国型偶见.
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淋球菌对氟喹诺酮类药物的耐药性研究
为了解淋球菌对氟喹诺酮类药物的耐药性,用琼脂稀释法和纸片扩散法分别对1998～1999年间广东省湛江地区分离出的98株淋球菌流行株进行了药物敏感性测定.测定了流行株对诺氟沙星、依诺沙星、环丙沙星、氧氟沙星和洛美沙星5种氟喹诺酮类药物的小抑菌浓度(MIC)和抑菌圈直径(mm),根据NCCLS标准判定敏感与耐药.结果表明,纸片扩散法测定淋球菌对这5种抗生素的耐药百分率分别为91.84%、97.96%、84.70%、75.71%和87.76%,而琼脂稀释法相应的耐药百分率为83.50%、91.20%、59.30%、53.80%和75.80%.结果提示,湛江地区淋球菌流行株对氟喹诺酮类药物耐药现象十分普遍,临床医生进行淋病治疗时要引起高度重视.
