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腺苷酸转运体的结构、功能及与疾病的关系
腺苷酸转运体(ANT)是核基因编码的位于线粒体内膜的双功能蛋白质,其生理功能是将胞浆中的ADp与线粒体的ATP以1:1进行交换.当其功能障碍时,影响细胞能量代谢,导致疾病或病情加重,与扩张型心肌病、进行性眼外肌麻痹等关系密切;ANT又是线粒体通透性转换孔的重要组成部分,参与调节线粒体通透性转换孔的开闭,与细胞凋亡关系密切.
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NT4-Ant-Shepherdin[79-87]融合基因重组腺相关病毒载体的构建及鉴定
目的:设计构建融合基因NT4-Ant-Shepherdin[79-87]的重组腺相关病毒表达载体.方法:应用非对称引物/模板法,PCR技术制备Ant-Shepherdin[79-87]cDNA片段,通过连接pGEM-T-Easy载体及PBV220-NT4质粒,转化感受态细胞,获得NT4-Ant-Shepherdin[79-87]融合基因,连接腺相关病毒穿梭质粒pSSHG-CMV,采用磷酸钙沉淀法三质粒共转染HEK-293细胞获取重组腺相关病毒,Dot-blot法测定重组病毒滴度,MTT比色法观察重组腺相关病毒对A549细胞存活率的影响.结果:合成Ant-Shepherdin[79-87]基因,连接PBV220-NT4,经克隆、酶切,琼脂糖凝胶电泳证实获得321 bp的NT4-Ant-Shepherdin[79-87]目的基因;得到高滴度的(3.4×1013pfu/L)重组腺相关病毒表达载体;带有融合基因NT4-Ant-Shepherdin[79-87]的重组腺相关病毒对A549细胞具有强烈的诱导凋亡作用.结论:成功构建了NT4-Ant-Shepherdin[79-87]融合基因的重组腺相关病毒表达载体,为进一步研究针对Survivin的靶向抗肿瘤作用奠定了基础.
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NT4-Ant-Shepherdin[79-87]融合基因重组载体的构建
目的 设计构建携带NT4-Ant-Shepherdin[79-87]的cDNA融合基因的重组载体,为针对Survivin的靶向治疗奠定基础.方法 应用非对称引物/模板法、PCR技术制备NT4-Ant-Shepherdin[79-87]cDNA片断,连接于pGEMT-Easy载体,经克隆测序、酶切后与PBV220/NT4质粒连接;转化感受态细胞E .coli DH5a,亚克隆获得NT4-AntShepherdin[79-87]融合基因.结果 克隆出Ant-Shepherdin[79-87]基因,经酶切及测序证实结果 正确;连接PBV220/NT4,经克隆、酶切,琼脂糖凝胶电泳证实获得321 bp的NT4-Ant-Shepherdinl[79-87]目的 基因片断.结论 通过分子生物学技术成功构建了携带NT4-Ant-shepherdin[79-87]融合基因的重组载体,为进一步研究针对Survivin的靶向抗肿瘤作用奠定了基础.
关键词： survivin ANT 神经营养因子4(NT4) 融合基因 载体
