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LINE1-ORF1p文献资料
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LINE1-ORF1p过表达对肾母细胞瘤细胞WT_CLS1增殖的影响
目的 制备LINE1-ORF1p多克隆抗体,研究LINE1-ORF1p过表达对肾母细胞瘤细胞WT_CLS1增殖的影响.方法 利用基因工程方法原核表达LINE1-ORF1p,免疫家兔制备多克隆抗体.间接ELISA法检测抗体效价,通过Western blot及免疫组化方法检测抗体对LINE1-ORF1p的特异性识别能力.构建真核表达载体pEGFP-N1-LINE1-ORF1,转染WT_CLS1细胞,通过Western blot和qRT-PCR检测LINE1-ORF1蛋白和基因的表达情况,采用细胞增殖实验和平板克隆形成实验检测LINE1-ORF1p对WT_CLS1细胞增殖及肿瘤细胞克隆形成的影响.结果 制备的LINE1-ORF1p抗体效价>1:16000,能对细胞及肿瘤组织内LINE1-ORF1p特异识别.转染pEGFP-N1-LINE1-ORF1的WT_CLS1细胞,其LINE1-ORF1的mRNA及蛋白水平显著增高(P<0.05),细胞增殖能力和克隆形成能力都显著增强(P<0.05).结论 LINE1-ORF1p可以促进肾母细胞瘤细胞的生长和肿瘤细胞克隆形成,可能参与肾母细胞瘤的发病机制.
关键词： LINE1-ORF1p 抗体 肾母细胞瘤 WT_CLS1细胞
