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敲低KCTD10对MHCC97H细胞体外致瘤性的影响
目的:检定KCTD10敲低是否影响人肝细胞癌MHCC97H细胞体外致瘤能力和肿瘤干细胞相关标志物蛋白表达.方法:用表达KCTD10 SiRNA载体包装慢病毒感染,嘌呤霉素筛选构建KCTD10敲低MHCC97H细胞亚系.球形成法和平皿集落形成法比较慢病毒感染对照和KCTD10敲低MHCC97H细胞的体外致瘤能力.蛋白质印迹或流式细胞术分析肿瘤干细胞相关标志物蛋白表达.结果:敲低KCTD10能有效地增强球形成和平皿集落形成率.此外,敲低KCTD10上调ALDH1A1,BMI1和Nanog蛋白表达.结论:敲低KCTD10增强MHCC97H细胞体外致瘤能力和肿瘤干细胞样特性.
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KCTD10基因干扰RNA慢病毒载体的构建
目的:构建KCTD10干扰RNA慢病毒载体.方法:合成KCTD10干扰序列,构建GV248-KCTD10-RNAi慢病毒干扰载体,利用PCR与测序验证阳性克隆.将KCTD10 siRNA干扰病毒载体与质粒pHelper1.0和质粒pHelper2.0三个载体共同转染293T细胞,使细胞合成并分泌释放病毒颗粒.收集病毒颗粒并检测病毒滴度.结果:GV248-KCTD10-RNAi慢病毒载体成功被连接转化,测序结果与设计序列一致;共转后收获KCTD10 siRNA慢病毒颗粒,检测其滴度为5×108TU/mL.结论:成功包装了KCTD10 siRNA慢病毒颗粒,为后续进一步研究KCTD10基因在糖尿病视网膜病变中的作用奠定了基础.
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KCTD10在神经胶质瘤中表达的初步研究
目的:初步探讨 KCTD10(potassium channel tetramerisation domain-containing 10)基因在神经胶质瘤中的表达及意义。方法:收集人神经胶质瘤标本6例,同时收集正常脑组织标本2例,用免疫组化染色法检测 KCTD10在这些标本中的表达情况。结果:在6例人神经胶质瘤切片中均检测到 KCTD10的高表达,而在2例正常脑组织中未检测到 KCTD10的表达。结论:KCTD10在人神经胶质瘤标本中表达水平较正常脑组织中明显增高,提示KCTD10可能在人神经胶质瘤的发生发展中起作用。