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转录介导的扩增技术文献资料
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转录介导的扩增技术与real-time RT-PCR在人类免疫缺陷病毒检测中的应用
目的:利用转录介导的扩增技术(transcription mediated amplification,TMA)扩增HIV RNA,探讨TMA技术扩增HIV RNA的敏感性及其与实时荧光定量反转录聚合酶链反应的比较.方法:利用TaqMan探针、特异性引物、鼠白血病反转录酶、T7-RNA聚合酶及PCR底物等建立TMA扩增体系.通过扩增一组10倍梯度稀释的HIV RNA转录标准品,评价TMA体系的灵敏性.收集60例HI感染患者的血浆,同时采用TMA试剂与Cobas Amplicor HIV-1 Monitor l.5版试剂进行检测,比较两种方法的阳性检出率,并利用线性回归和Bland-Altman法分析两种技术的相关性和一致性.结果:成功建立了TMA扩增体系,这种技术可以检测低至10 copies/mL的HI转录标准品.60份HI感染者血浆样本中,TMA及Cobas均检测到阳性46份,均阴性l2份,TMA检测阴性而Cobas检测阳性样本2份,检测一致率为96.7％.两种技术阳性检出率差异无统计学意义(P＞0.05).对其中46份TMA检测和Cobas检测均有定量结果的血浆进行线性回归分析,两种技术有非常好的相关性(r=0.997,P＜0.001).Bland-Altman分析显示两种检测方法定量Lg差值平均值为0.02,44份(95.7％)样本在95％的一致性界限内.结论:TMA技术具有高灵敏性潜能.TMA与real-time RT-PCR检测血浆中HIV RN具有非常好的相关性与一致性.
