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不同检测技术检测痰液标本中肺炎链球菌的应用价值
目的 探讨不同检测技术在检测痰液标本中肺炎链球菌(SP)的应用价值.方法 选取2015年6月至2016年6月于本院诊治的获得性肺炎患者50例为研究对象,将其痰液标本分别运用荧光定量聚合酶链反应(荧光定量PCR)法、环介导恒温扩增技术(LAMP)以及传统方法进行检测,观察三种检测方法的临床检测效果及敏感度.结果 LAMP法检出的阳性率高,但与荧光定量PCR法比较,差异无统计学意义(P>0.05);而LAMP法与荧光定量PCR法检测的阳性率均分别高于传统方法检测的阳性率,差异有统计学意义(P<0.05).LAMP法在35 min时检测低菌液浓度为103 cfu/mL,60 min时检测低菌液浓度为102 cfu/mL;荧光定量PCR法在30个循环中检测低菌液浓度为104 cfu/mL.LAMP法(60 min)较荧光定量PCR法(30个循环)的灵敏度更高.结论 LAMP法与荧光定量PCR检测方法的检测效果均十分显著,但LAMP法在检测肺炎链球菌更加快捷、简便,对病情的快速诊断具有重要意义,值得临床推广.
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环介导恒温扩增法对嗜麦芽寡养单胞菌L2型头孢菌素β内酰胺酶基因的快速检测
目的 建立快速检测L2型头孢菌素β内酰胺酶的方法.方法 利用DNA环介导恒温核酸扩增法(loopmediated isothermal amplification of DNA,LAMP)针对L2型头孢菌素β内酰胺酶基因设计的5条特异性引物,通过引物特异性识别特定BlaL:基因上的7个独立区域实现耐碳青霉烯类嗜麦芽寡养单胞菌的检测.实时浊度仪监测反应结果表明,LAMP反应在65℃恒温条件下50 min内完成;钙黄绿素可视化检测表明阳性结果呈绿色,与阴性结果差异显著.结果 LAMP法低检出基因的浓度为2.58 pg/μl,其灵敏度为PCR法的100倍,且具有良好的特异性.结论 LAMP法具有过程简单、实验装置简便、结果肉眼可辨别、灵敏度高、特异性强等特点,对非L2型头孢菌素β内酰胺酶基因的结果呈阴性,适用于临床L2型头孢菌素β内酰胺酶基因的快速检测.
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LAMP技术快速检测产肠毒素性大肠埃希菌的LTⅠ毒素
目的:建立环介导恒温扩增快速检测肠毒素性大肠埃希菌的LT Ⅰ毒素的方法.方法:采用环介导恒温扩增反应(LAMP)技术扩增肠毒素性大肠埃希菌的IT Ⅰ毒素特异性基因,优化反应条件,并与传统PCR比较.结果:与传统的PCR技术相比,LAMP法更加简便快速,且在等温条件下进行,具有更高的灵敏性及特异性.结论:该方法灵敏度高,特异性强,操作简便快速,不需要复杂仪器设备,为检测产肠毒素性大肠埃希菌的LT Ⅰ毒素提供了一个快速简便的新方法.
