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稳定剂保护PCR扩增dU-DNA效果研究
目的:了解94℃灭活UDG与不灭活及扩增产物加稳定剂与不加稳定剂对DNA杂交效率的影响.方法:采用微孔板DNA杂交技术检测PCR扩增dU-DNA杂交效果.以不加UDG组DNA杂交A值为对照、计算杂交百分率.结果:不加UDG组扩增前后未经94℃灭活处理-20℃保存20h杂交效率为90.293%,加UDG组在4℃、室温、37℃放置20h,杂交效率为20.15%,21.37%,29.37%.加UDG并增加94℃灭活步骤、37℃水浴放置20h,杂交效率为73.57%,78.82%.在此基础上加入稳定剂37℃水浴43h杂交效率达到99.88%～100%.37℃水浴67h杂交效率仍达到86.06%～97.10%.结论:上述结果证实用于抗污染时,扩增前后增设94℃灭活10min可提高杂交效率.加入稳定剂可使杂交A值1.80达到对照组A值1.81水平.提示稳定剂对保护PCR扩增dU-DNA有极其重要作用.
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基因扩增技术中抗污染的研究
目的了解残留UDG对dU-DNA PCR物的影响及灭活UDG时对Taq-P的影响.方法采用微孔板杂交技术检测dU-DNAPCR产物37℃放置20h杂交百分率;检测在-20℃、4℃、室温、37℃时不同保存条件下的杂交百分率;94℃灭活10min对Taq-P活性的影响.结果加0.2单位、1.0单位UDG组比不加UDG组杂交A值下降13.281%～20.557%.t检验差异有显著性(t＝2.855,2.869,P＜0.05);经94℃灭活产物组37℃杂交A值比-20℃A值下降5.547%,未经94℃灭活杂交A值下降10.345%;94℃预变性30s杂交A值为98.714%、10min 30s组杂交A值为96.818%.结论以上结果提示经94℃加热灭活对PCR产物保存有重要作用,不仅对灭活UDG有作用而且还可灭活来源于UDG以外可破坏DNA的酶.表明含UDG组杂交A值比不加UDG组低13.281%～20.557%与UDG有关.
