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MiR-194对恶性黑色素瘤细胞增殖和凋亡的影响及机制
目的 研究miR-194对人恶性黑色素瘤细胞的增殖和凋亡的影响及机制.方法 应用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)分别检测miR-194在原代正常人皮肤黑色素细胞系PIG1和5种恶性黑色素瘤细胞系(A375、SK-MEL-1、SK-MEL-2、SK-MEL-5及SK-MEL-28)中的相对表达量.利用LipofectamineTM2000分别将A375细胞系转染miR-194 mimics和阴性对照质粒,从而将A375细胞系分为miR-194模拟物组和阴性对照组;应用MTT法和流式细胞术分别测定miR-194模拟物组和阴性对照组细胞的增殖能力及凋亡率,蛋白印迹(Western blot)分别检测miR-194模拟物组和阴性对照组的细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、裂解型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Cleaved Caspase-3)蛋白表达情况.结果 miR-194在5种黑色素瘤细胞系A375、SK-MEL-1、SK-MEL-2、SK-MEL-5及SK-MEL-28中的表达水平低于正常人皮肤黑色素细胞系PIG1,依次分别是正常细胞系的(0.18±0.03)、(0.25±0.05)、(0.37±0.03)、(0.39±0.04)及(0.45±0.03)倍(均P＜0.05).转染后第0、1、2、3、4及5天,miR-194模拟物组Vs阴性对照组的OD值分别为:(0.18±0.02) vs(0.19±0.03) (P ＞0.05)、(0.29±0.02) vs (0.27±0.03)(P＞0.05)、(0.42±0.08) vs (0.45±0.07)(P＞0.05)、(0.63±0.09) vs(1.17±0.12)(P＜0.05)、(1.05±0.15) vs (2.15±0.21)(P ＜0.05)及(1.87±0.23) vs (3.18±0.27)(P＜0.05).miR-194模拟物组和阴性对照组的细胞凋亡率分别为24.2％和9.3％(P＜0.05).Cyclin D1和Cleaved Caspase-3蛋白在miR-194模拟物组中的表达量分别是阴性对照组的(0.36±0.04)和(3.2±0.28)倍(均P＜0.05).结论 miR-194在黑色素瘤细胞中低表达,miR-194表达上调可促进黑色素瘤细胞凋亡并抑制黑色素瘤细胞的增殖,其机制可能为下调Cyclin D1蛋白及上调Cleaved Caspase-3蛋白表达.
