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MicroRNA-9通过下调TGFBR2表达抑制肝星状细胞增殖和胶原合成
目的 探讨MicroRNA-9 (miR-9)对肝星状细胞增殖和胶原合成的影响并研究其相关机制.方法 设计合成miR-9特异性模拟物(miR-9 mimics),将其转入肝星状细胞中,培养48 h后收集细胞,采用实时定量PCR技术(qRT-PCR)验证miR-9 mimics转染细胞中miR-9的变化水平、Western blot检测Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原蛋白表达、噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况;通过qRT-PCR和Western blot检测转染miR-9 mimics后其潜在靶点转化生长因子-β1受体2(TGFBR2)的表达水平.结果 与对照组相比,转染miR-9 mimics后,检测肝星状细胞中miR-9表达量明显升高(P＜0.05).过表达miR-9后Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原蛋白分别降低约(44±2)％和(50±3)％(P＜0.05),细胞增殖活性降低约(48±4)％(P＜0.01),TGFBR2的表达水平降低(P＜0.05).结论 过表达miR-9可抑制肝星状细胞胶原合成和细胞增殖,此机制可能是通过下调TGFBR2的表达来实现.
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let-7a通过调控BAFF参与嗜酸粒细胞型CRSwNP发病机制的初步研究
目的 初步探讨嗜酸粒细胞型的伴有鼻息肉的慢性鼻-鼻窦炎(Eos CRSwNP)发病过程中miRNA对B淋巴细胞刺激因子(BAFF)的调控影响.方法 收集2012年1月至2013年2月在本院治疗的Eos CRSwNP患者鼻黏膜标本10例和正常鼻黏膜标本10例.运用生物信息学软件(Pictar、TargetScan及miRanda)预测对BAFF进行调控的miRNA.运用实时定量PCR检测Eos CRSwNP鼻黏膜中let-7a的表达;采用免疫组化方法检测BAFF蛋白质表达水平;应用Spearman's检验分析let-7a与BAFF的相关性.结果 let-7a在Eos CRSwNP表达明显下降(P＜0.05),BAFF蛋白质表达升高(P＜0.05),两者均表达于上皮细胞且呈负相关(r=-0.66,P＜0.05).结论 let-7a可能通过调控BAFF,参与EosCRSwNP中嗜酸粒细胞的活化.
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miR-218对胃癌细胞增殖及周期影响的研究
目的 探讨miR-218对胃癌细胞增殖及细胞周期的影响.方法 将miR-218 mimics转染胃癌细胞株SGC-7901和MGC-803细胞,以无关序列(Scramble mimics)作为阴性对照.采用qRT-PCR技术验证miR-218 mimics转染细胞中miR-218的表达水平;通过细胞计数法及MTS[3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧甲酯基)-2-(4-磺苯基)-2氢-四唑,内盐]法观察miR-218过表达对胃癌细胞增殖的影响;采用流式细胞术观察miR-218过表达对胃癌细胞周期的影响.结果 转染miR-218 mimics胃癌细胞中miR-218的表达量较对照细胞显著升高.过表达miR-218的胃癌癌细胞增殖速度明显减慢(P＜0.05).通过流式细胞术分析细胞周期发现,过表达miR-218的胃癌细胞阻滞于G1期.结论 miR-218能抑制胃癌细胞生长增殖,阻止胃癌细胞周期进程,它可能在胃癌的发生发展中发挥重要作用.
