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丹芍化纤胶囊对体内外活化肝星状细胞增殖的影响
目的:研究中药复方制剂丹芍化纤胶囊对体内外活化肝星状细胞(HSCs)增殖的影响.方法:(1)体内实验:雄性Wistar大鼠57只分为正常组、模型组、治疗组.除正常组外,其余各组采用CCl4、饮酒、高脂低蛋白饮食等复合病因刺激制备肝纤维化动物模型8周,然后治疗组给予丹芍化纤胶囊(1g/kg体重)灌胃治疗8周.实验结束时部分大鼠用于测定肝功能及肝脏纤维化程度;部分用于分离HSCs,流式细胞仪检测细胞周期百分比.(2)体外实验:制备丹芍化纤胶囊大鼠药物血清;分离培养大鼠HSCs,并分为小牛血清组、正常大鼠血清组、丹芍化纤药物血清组,分别加入5%、10%、20%以上3种血清干预培养的HSCs,MTT比色法测定原代HSCs增殖情况.结果:(1)体内实验:治疗组较模型组肝功能、肝脏纤维化程度及HSCs增殖明显减轻.(2)体外实验:丹芍化纤药物血清组较同浓度小牛血清组、正常大鼠血清组明显抑制HSCs增殖,且此作用呈剂量依赖性.结论:丹芍化纤胶囊能显著抑制体内外HSCs增殖.
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雷公藤红素对肝星状细胞增殖及其α-SMA表达的影响
目的:探讨雷公藤红素抗肝纤维化的作用机制.方法:活化的HSC-T6细胞分别加不同浓度的雷公藤红素进行培养,采用MTT法检测HSC-T6细胞的增殖情况,采用免疫组化法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达变化.结果:雷公藤红素作用HSC-T6细胞24小时后,2.5、25、50μg/ml浓度雷公藤红素对肝星状细胞HST-T6增殖的抑制率分别为6.97％、13.01％、18.23％,显著高于对照组,与药物浓度呈正相关.雷公藤红素2.5、25、50μg/ml浓度培养的HSC-T6细胞的α-SMA阳性表达率明显下降,与空白组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论:雷公藤红素能够抑制肝星状细胞活化及增殖,抑制α-SMA表达.
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MicroRNA-9通过下调TGFBR2表达抑制肝星状细胞增殖和胶原合成
目的 探讨MicroRNA-9 (miR-9)对肝星状细胞增殖和胶原合成的影响并研究其相关机制.方法 设计合成miR-9特异性模拟物(miR-9 mimics),将其转入肝星状细胞中,培养48 h后收集细胞,采用实时定量PCR技术(qRT-PCR)验证miR-9 mimics转染细胞中miR-9的变化水平、Western blot检测Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原蛋白表达、噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况;通过qRT-PCR和Western blot检测转染miR-9 mimics后其潜在靶点转化生长因子-β1受体2(TGFBR2)的表达水平.结果 与对照组相比,转染miR-9 mimics后,检测肝星状细胞中miR-9表达量明显升高(P＜0.05).过表达miR-9后Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原蛋白分别降低约(44±2)％和(50±3)％(P＜0.05),细胞增殖活性降低约(48±4)％(P＜0.01),TGFBR2的表达水平降低(P＜0.05).结论 过表达miR-9可抑制肝星状细胞胶原合成和细胞增殖,此机制可能是通过下调TGFBR2的表达来实现.
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特异性miRNA-200b抑制剂对肝星状细胞生物学特性的影响
目的 观察特异性miRNA-200b抑制剂对肝星状细胞增殖、活化、胶原合成的影响.方法 设计并合成miR-200b抑制剂,利用脂质体将miRNA-200b抑制剂转入肝星状细胞中,培养48 h后,收集肝星状细胞和上清液,采用qRT-PCR探针的方法检测miR-200b的表达水平、Westernblotting检测细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达、噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性和放射免疫法检测培养上清液中Ⅲ型前胶原和透明质酸含量.结果 与阴性对照组相比,miRNA-200b抑制剂转染48 h后HSC-T6细胞miR-200b组表达下调82％;α-SMA蛋白表达降低(19±3)％(P＜0.05);细胞增殖活性降低(33±5)％(P＜0.01);培养上清中Ⅲ型前胶原和透明质酸含量分别降低(35±4)％和(31±2)％(均P ＜0.01).结论 miRNA-200b抑制剂下调HSC-T6细胞中miR-200b表达,抑制肝星状细胞增殖与活化,减少细胞外基质的合成和分泌.
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清脑益智方对谷氨酸损伤神经元保护作用的体外实验观察
目的:探求清脑益智方治疗血管性痴呆或多发梗塞性痴呆的作用机理.方法:应用体外细胞培养的方法,观察中药对谷氨酸损伤神经元的影响.结果:清脑益智方可明显提高谷氨酸损伤后神经元的存活率(P＜0.05);降低孵育液中LDH含量(P＜0.05);提高细胞生存活力(MTT);对星型胶质细胞的增殖没有影响(3H-TdR).结论:清脑益智方可能通过刺激星形胶质细胞分泌神经营养因子而起到对神经元的保护作用.
