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过表达NDRG1对TGF-β诱导肺癌A549细胞上皮-间质转化的逆转作用
目的 探讨NDRG1对转化生长因子β(TGF-β)诱导的人肺癌A549细胞上皮-间质转化(EMT)的逆转作用及可能机制.方法 转染NDRG1过表达质粒至A549细胞,采用5 μg/L TGF-β1处理细胞,相差显微镜观察细胞形态学变化;Transwell侵袭实验检测A549细胞侵袭能力;Real-time RT-PCR、Western blot分别检测NDRGl mRNA、蛋白的表达,Western blot检测EMT相关标志物钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin),以及EMT相关信号分子Snail、AKT、Smad的表达.结果 TGF-131可诱导A549细胞向间质样细胞表型转化,上调间质样标志物Vimentin表达和下调上皮样标志物E-cadherin表达,并增强细胞侵袭能力;过表达NDRG1可逆转TGF-131的上述作用;且过表达NDRG1能够抑制AKT的磷酸化,下调EMT转录因子Snail的表达.结论 NDRG1能够逆转TGF-B1对人肺癌A549细胞上皮一间质转化的诱导作用,并降低细胞的侵袭能力,其机制可能与NDRG1抑制AKT/Snail信号有关.
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过表达MIF对宫颈癌SiHa细胞上皮-间质转化的影响
目的 研究过表达巨噬细胞移动抑制因子(MIF)对宫颈癌SiHa细胞上皮间质转化(EMT)的影响作用.方法 通过构建重组真核表达载体构建pEGFP-N1-MIF,转染宫颈癌SiHa细胞(SiHa-pEGFP-N1-MIF组),同时设空载体转染组(SiHa-pEGFP-N1组)和空白对照组(SiHa细胞组),采用蛋白质印迹法(western blot W.B)检测SiHa细胞中MIF蛋白表达的变化,并检测转染前后SiHa细胞中EMT相关指标E-cadherin和Vimentin的表达变化.结果 pEGFP-N1-MIF转染SiHa细胞后MIF蛋白的表达量增加,高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);且过表达MIF基因后,与对照组相比,pEGFP-N1-MIF组SiHa细胞上皮标志物E-cadherin的蛋白表达水平下调(P<0.05),间叶标志物Vimentin的蛋白表达水平显著上调(P<0.05).结论 过表达MIF基因可促进宫颈癌SiHa细胞发生上皮-间质转化的能力.