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Rab2文献资料
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华支睾吸虫Rab2基因的克隆表达及生物学特性分析
目的 获得原核表达的华支睾吸虫Rab2蛋白,并探索其生物学特性.方法 从华支睾吸虫cDNA文库获得CsRab2的全长cDNA,NCBI搜索与之相似度高的基因序列,预测其所含结构域和功能;应用Vector NTI程序对来自于GenBank中与之有较高相似度的基因序列进行分析,构建基因进化树;Swiss-model预测其三维立体结构,原核表达重组融合蛋白CsRab2,采用Western blot鉴定重组蛋白CsRab2,采用qRT-PCR测定CsRab2基因在不同发育阶段的表达水平.结果 CsRab2全长基因的ORF包含588个碱基,编码195个氨基酸.ProtParam预测该编码蛋白的理论分子量和等电点分别是22.29× 103Mr和5.87.不含有信号肽,也未发现线粒体等亚细胞定位序列,三维预测结果显示,Rab2同Rab家族的其他蛋白类似:由保守的G结构域和长度、序列上高度可变的N端和C端形成.将纯化后的蛋白进行SDS-PAGE电泳,考马斯亮蓝染色观察该目的蛋白分子量约28× 103 Mr.经过亲和层析方法纯化获得的rCsRab2,可被His tag小鼠单克隆抗体识别.CsRab2在华支睾吸虫各生活史阶段均有表达,且在囊蚴和尾蚴阶段表达较高.结论 CsRab2属于保守蛋白,其生物信息学分析符合Rab家族蛋白的共有特性,在囊蚴和尾蚴阶段表达较高,但CsRab2在细胞内确切的定位信息和功能仍有待进一步研究.
