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人DEPDC7基因启动子的转录活性分析
目的 对人DEPDC7基因近端启动子进行生物信息学分析并构建该启动子的荧光素酶报告系统,初步探讨该启动子的活性.方法 采用生物信息学方法对人DEPDC7基因的启动子和转录因子进行分析和预测,通过PCR法扩增DEPDC7基因近端启动子序列,PCR产物经HindⅢ和XhoⅠ双酶切后定向克隆到pGL2-Basic载体,构建一系列的启动子区域荧光素酶报告基因载体,随后经脂质体转染入293T细胞并检测各缺失片段萤光素酶活性.结果 人DEPDC7基因位于11p13,翻译起始位点上游1 300 bp左右可能为启动子区域.经双荧光素酶报告基因检测后发现,所有的重组质粒均表现出荧光素酶活性,其中pGL2-DEPDC7P3活性强.结论 初步证明人DEPDC7基因启动子在-879 bp～+100 bp区域具有较强转录活性,为进一步揭示该基因生物学功能和其分子调控机制奠定基础.
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DEPDC7基因在肝细胞及肿瘤细胞中的差异性表达
目的 研究DEPDC7基因在正常肝细胞、肝癌细胞及其他肿瘤细胞中的表达情况.方法 常规培养正常肝细胞HL-7702,肝癌细胞SMMC7721、HepG2、Huh-7,其他肿瘤细胞ZR-7530、MDA-MB-231、SGC7901、SW480.用MTT检测肝癌细胞转染前后的增殖情况,用RT-PCR方法在转录水平检测DEPDC7基因的表达,用Western blot方法从蛋白质水平检测DEPDC7蛋白的表达.结果 3株肝癌细胞生长增殖速度差异有统计学意义(P＜0.05).肝癌细胞DEPDC7基因在mRNA和蛋白质表达水平比正常肝细胞降低(P＜0.05),而其他肿瘤细胞DEPDC7基因表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 DEPDC7基因在正常肝细胞中选择性高表达,而在肝癌细胞株中呈低表达.
