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TP47蛋白文献资料
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TP47蛋白在梅毒血清学诊断中的应用
目的 采用原核基因工程技术重组表达梅毒螺旋体TP47蛋白,探讨其在梅毒血清学诊断中的应用.方法 PCR扩增获得TP47基因片段并构建pET28b-TP47原核表达重组质粒,转化到大肠杆菌BL21中,以IPTG诱导蛋白质表达,经镍柱纯化后通过质谱技术进行鉴定.采用免疫印迹法测定其与梅毒患者血清的免疫反应性.建立基于重组TP47抗原的ELISA间接法并对30份TPPA阳性血清和75份TPPA阴性血清进行方法学验证.结果 PCR扩增获得约1.1 kb的基因片段,成功构建原核表达载体pET28b -TP47.重组蛋白在细菌中以包涵体形式表达,约占菌体蛋白含量的70％,分子量约39 000 Mr,经纯化后其纯度约95％.经质谱分析表明重组蛋白为TP47蛋白.免疫印迹法证实TP47蛋白能够与梅毒患者血清发生特异性反应,ELISA测定TPPA阳性血清和阴性血清的符合率分别为97％(29/30)和97％ (73/75).结论 通过DNA重组技术成功获得了梅毒螺旋体TP47蛋白,证实其与梅毒阳性血清具有良好的反应性,为研发新一代梅毒感染诊断试剂盒奠定了基础.
