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D13L文献资料
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一种新型慢病毒载体制备体系的改进
目的 完善已初步建立的以痘病毒为辅助病毒的慢病毒载体(LV)瞬时制备体系.方法 通过同源重组质粒pZIPPY-NEO/GUS,将vTF7-3痘病毒D13L基因的ORF通过同源重组被新霉素基因(neo)以及可视性筛选基因(GuS)替代,制备D13L缺陷性痘病毒(vTF7-3-ΔD13L).结果 经RT-PCR鉴定,D13L基因被完全敲除.制备体系中将vTF7-3-ΔD13L代替vTF7-3后,制备体系培养上清经RT-PCR、Western blotting分别检测到慢病毒载体特异性RNA序列以及特征性p24蛋白的存在,提示系统可以正常制备出慢病毒载体颗粒,并进一步评价了慢病毒载体的感染性.此外,对此系统的动力学特征也进行了初步分析.结论 vTF7-3-ΔD 13L制备成功,通过此系统可制备出没有复制性痘病毒污染的慢病毒载体,本研究为该系统的大规模应用奠定了客观基础.
