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2009 H1N1病毒文献资料
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2009H1N1流感病毒神经氨酸酶基因克隆与表达
目的 制备2009 H1N1流感病毒神经氨酸酶(NA)重组蛋白,为建立H1N1快速检测方法 和神经氨酸酶抑制剂筛选模型奠定基础.方法 采用MDCK细胞方法 分离2009 H1N1流感病毒,提取病毒RNA,RT-PCR生成NA基因,构建原核表达载体PET- 102/D-TOPO-NA,IPTG诱导表达重组蛋白,SDS-PAGE凝胶电泳、Werstern Blotting鉴定重组蛋白.结果 成功分离2009H1N1流感病毒,NA蛋白119、152、275、292位氨基酸分别为Glu、Arg、His和Cys.SDS-PAGE凝胶电泳蛋白分子相对分子质量约为64 000,与预期一致.Western Blotting证实该蛋白具有神经氨酸酶抗原活性.结论 IPTG诱导原核表达神经氨酸蛋白的适浓度为0.1 mmol/L.实验得到的蛋白尚需进一步纯化.
关键词： 2009 H1N1病毒 MDCK细胞 神经氨酸酶 原核表达
