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MARCO基因敲除小鼠模型鉴定
目的 通过基因分型、基因测序与蛋白免疫印迹法鉴定MARCO基因敲除小鼠模型.方法 将经成簇的规律间隔短回文重复序列(CRISPR)/CRISPR相关蛋白9(Cas9)技术获得16种碱基敲除的MARCO-/-亲代C57BL/6小鼠(雌、雄鼠各8只)与MARCO+/+的亲代C57BL/6雌性小鼠(8只)合笼繁殖,获得子一代MARCO+/-小鼠;再以MARCO+/-小鼠自交得到MARCO-/-足够数量的纯合小鼠.采用基因测序对小鼠基因型进行鉴定,采用蛋白免疫印迹法检测MARCO蛋白相对表达水平.结果 经过1年的合笼繁殖,共繁殖5代,有5种敲除不同碱基数(-11、-25、-36、-46、-61 bp)的MARCO-/-基因型稳定遗传;MARCO-/-、MARCO+/-、MARCO+/+基因型比例约为1∶2∶1,符合孟德尔遗传定律.以MARCO(-11 bp)为例,共获得子五代(F5代)MARCO-/-小鼠42只,MARCO+/-小鼠92只,MARCO+/+小鼠48只;上述3种基因型F5代小鼠出生后第4、6和8周的体质量分别比较,差异无统计学意义(P＞0.05).与MARCO+/+小鼠和MARCO-/-(-36 bp)、MARCO-/-(-61 bp)小鼠比较,MARCO-/-(-11 bp)和MARCO-/-(-46 bp)小鼠的MARCO蛋白相对表达水平均下调(P＜0.05),选择该2种小鼠模型作为MARCO基因敲除小鼠模型.结论 成功鉴定MARCO基因敲除小鼠模型,为深入研究MARCO基因在小鼠矽肺纤维化中的作用及调控机制奠定基础.
