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蜂胶黄酮PB3A作用下结肠癌细胞株中miRNA-198和miRNA-296-5p的表达及功能预测
目的: 探讨蜂胶黄酮短叶松素-3-乙酸酯(pinobanksin-3-acetate,PB3A)对结肠癌SW480细胞微小RNA(microRNA, miRNA)表达谱的影响,为结肠癌的治疗及靶向药物研发提供理论依据.方法: 使用miRNA芯片技术分析检测蜂胶黄酮PB3A处理人类结肠癌SW480细胞后miRNA表达谱的变化.通过实时荧光定量PCR方法检测miRNA-198和miRNA-296-5p的表达水平,以此来验证miRNA芯片结果的准确性和可靠性.利用miRWalk、MicroT、miRanda等12个网上数据库预测这2条miRNAs的靶基因并进行靶基因功能富集分析.结果: miRNA芯片分析结果显示,蜂胶黄酮PB3A干预24 h后结肠癌SW480细胞中差异表达倍数在2倍及以上的miRNA有267条,其中差异表达倍数达10倍及以上的miRNA有30条,28条为上调表达,2条下调表达;RT-qPCR实验结果显示miRNA-198和miRNA-296-5p的表达量趋势跟miRNA芯片结果一致,表达差异有统计学意义(P<0.05).miRNA靶基因预测发现miRNA-198有859个靶基因,miRNA-296-5p有906个靶基因;对这些可能被调控的靶基因进行Gene Class分析,结果显示miRNA-198和miRNA-296-5p的靶基因功能主要为转录因子、拷贝数变异、细胞分化、癌基因、蛋白激酶、组蛋白、转移癌基因、肿瘤抑制基因等(P<0.05).信号通路富集分析结果显示,miRNA-198靶基因显著富集于肿瘤通路、Wnt信号通路、胞吞通路、ErbB信号通路、黏着斑通路、黑素生成通路等信号通路,而miRNA-296-5p靶基因在MAPK信号通路、胞吞通路、轴突导向通路、Wnt信号通路、胰岛素信号通路、钙离子信号通路等信号通路中出现聚集(P<0.05).结论: 蜂胶黄酮PB3A 影响结肠癌SW480细胞的miRNA表达谱.PB3A作用下miRNA-198和miRNA-296-5p的异常表达可能参与PB3A抗结肠癌的过程.
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循环miRNA-296-5p与原发性高血压发病机制的相关性研究
目的:探讨血浆中miRNA-296-5p与原发性高血压(EH)的相关性.方法:选取EH患者80例和非EH患者80例,收集两组患者基本病史、心血管疾病用药情况等一般资料,采用qRT-PCR检测其血浆中循环miRNA-296-5p的表达水平,生物信息学预测miRNA-296-5p的靶基因以及其调控的信号通路,ELISA检测两组患者血浆中TGF-β1和ACE2的表达,并分析两者与miRNA-2966p的相关性.结果:EH组与非EH组在年龄、性别、BMI、基本病史和部分血液学生化指标比较,差异无统计学意义(P＞0.05);EH组血浆中循环miRNA-296-5p表达水平明显高于非EH(P ＜0.01);ROC曲线分析发现曲缺中miRNA-296-5p曲线下面积为0.844 5,95％可信区间为(CI)0.782 5～0.906 4 (P ＜0.01),灵敏度80.00％,特异性90.00％;生物信息学预测发现miRNA-296-5p的靶基因可能为血管转化生长因子-β1(TGF-β1)和血管紧张素转化酶2(ACE2),可能调控血管转化生长因子/SMAD(TGF-p/SMAD)、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3 K-Akt)、胰岛素/胰岛素生长因子信号通路(Insulin/IGF)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和NOTCH等信号通路,并可能参与多种circRNA的调控;ELISA检测发现EH组TGF-β1和ACE2的表达明显高于非EH组(P＜0.01),miRNA-296-5与TGF-β1、ACE2均呈正相关(r=0.317 6、0.417 1,P＜0.01).结论:血浆中循环miRNA-296-5p可能通过调控TGF-β1和ACE2导致EH的发生,并可以作为EH新的临床诊断标志物.
