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消痰通腑方对结肠癌SW480细胞磷脂酶A2、环氧合酶2表达及细胞生物学行为的影响
目的 观察消痰通腑方对结肠癌SW480细胞增殖、迁移的影响,探讨其分子作用机制.方法 采用不同浓度消痰通腑方作用结肠癌SW480细胞,CCK8法和平板克隆形成实验检测细胞增殖,Transwell小室实验检测细胞迁移能力,RT-qPCR检测磷脂酶A2(PLA2)和环氧合酶2(COX-2) mRNA表达,Western blot检测PLA2和COX2蛋白表达,RNA干扰技术沉默SW480细胞株中PLA2基因表达.结果 消痰通腑方低、高剂量组较对照组结肠癌SW480细胞增殖能力明显减弱(P＜0.05),克隆形成率及迁移能力明显下降(P＜0.05,P＜ 0.01),PLA2、COX-2 mRNA和蛋白表达均明显下调(P＜0.05),并呈浓度依赖性;与质粒对照组和对照组比较,PLA2 shRNA干扰组细胞PLA2和COX2蛋白表达明显下调(P＜0.05).结论 消痰通腑方可抑制结肠癌SW480细胞增殖和迁移,其机制可能与PLA2及COX-2的表达下调有关.
关键词： 消痰通腑方 磷脂酶A2 环氧合酶2 结肠癌SW480细胞 -
DADS下调肌动蛋白解聚因子抑制人结肠癌SW480细胞迁移与侵袭
目的:研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)对人结肠癌SW480细胞肌动蛋白解聚因子(actin depolymerizingfactor,ADF)表达及肿瘤细胞增殖、迁移与侵袭能力的影响.方法:MTT、划痕愈合和侵袭实验分别检测DADS对SW480细胞增殖、迁移与侵袭的影响;RT-PCR、Western blot检测DADS对SW480细胞destrin与cofilin1表达的作用.结果:MTT分析显示,不同浓度DADS处理SW480细胞24、48、72、96 h后,可呈时间-剂量依赖性抑制SW480细胞增殖(P<0.05).划痕愈合实验显示,20、30、40、50 mg/L DADS处理48h后,细胞迁移率分别为55.51%、34.72%、23.23%、12.87%,较对照组75.86%与DMSO组72.58%明显降低(P<0.05),表明DADS呈浓度依赖性抑制SW480细胞迁移.Transwell侵袭显示,20、30、40、50 mg/L DADS作用24 h后,穿膜细胞数呈剂量依赖性分别减少34.67%、50.54%、57.12%、64.59%(P<0.05).45mg/L DADS处理SW480细胞24、48 h后,destrinmRNA下调24.7%、60.1%,蛋白下调30.1%、58.9%(P<0.05),而处理前后cofilin1 mRNA与蛋白表达无显著性差异(P>0.05).但SW480细胞处理1、15、30、60 min后,p-cofilin1表达呈时间依赖性分别下调18.9%、53.8%、62.1%、78.2%(P<0.05).结论:DADS抑制人结肠癌SW480细胞迁移与侵袭可能与下调destrin和p-cofilin1有关.
关键词： 二烯丙基二硫 结肠癌SW480细胞 肌动蛋白解聚因子 迁移 侵袭 -
miR-200c通过wnt/β-catenin信号途径抑制SW480结肠癌细胞的侵袭和转移
目的 研究miR-200c通过wnt/B-catenin信号通路对结肠癌SW480细胞侵袭、迁移的影响.方法 将SW480细胞分为类似物转染(A)组、抑制物转染(B)组、类似物阴性对照(C)组、抑制物阴性对照组(D)和空白(E)组.荧光定量PCR检测12h和24h转染效率,划痕实验和Transwell侵袭实验检测细胞迁移和侵袭,Western blot检测转染后β-catenin和E-cadherin的表达.结果 细胞划痕实验显示,A组12 h和24h后伤痕宽度分别为(589.61±17.28) μm和(523.83±57.13) μm,C组分别为(465.33±16.60) μm和(393.99±7.53)μm,A组高于C组(P＜0.05).B组12h和24h后分别为(430.93±20.76) μm和(221.38±44.37) μm,D组分别为(485.64±16.65) μm和(441.22±22.40) μm,B组低于D组(P＜0.05).Transwe11实验显示,与C组和D组相比,A组24h和48 h通过8μm孔径的细胞数明显减少,B组明显增多(P＜0.05).A组β-catenin和E-cadherin的表达均升高,B组各蛋白表达下降(P＜0.05).结论 miR-200c可能通过wnt/β-catenin信号通路抑制SW480结肠癌细胞的侵袭和迁移.
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沉默LIMK1促进DADS抑制SW480细胞迁移与侵袭
目的 探讨LIMK1沉默对DADS抑制SW480细胞迁移与侵袭的影响.方法 RNA干扰技术建立稳定LIMK1-miRNA/SW480细胞株;免疫组化和Western blot检测DADS对沉默LIMK1结肠癌SW480细胞LIMK1和磷酸化LIMK1蛋白表达的影响.划痕实验和侵袭实验检测LIMK1 RNA沉默与DADS对SW480细胞迁移与侵袭的影响.结果 RT-PCR与Western blot显示,LIMK1-miR/SW480细胞LIMK1mNRA与蛋白表达明显下调,表明成功构建稳定沉默LIMK1基因的SW480细胞株.免疫组化和Western blot显示,45 mg· L-1 DADS处理和沉默LIMK1组较未转染组与空载体组SW480细胞LIMK1蛋白和磷酸化LIMK1明显下调 (P<0.05).划痕实验和侵袭实验发现,沉默LIMK1或DADS处理SW480细胞的迁移与侵袭能力较未转染组与空载体组明显抑制 (P<0.05).而DADS处理沉默组抑制SW480细胞迁移和侵袭能力更为明显 (P<0.05).结论 沉默LIMK1基因可抑制SW480细胞迁移与侵袭,增强DADS抑制SW480细胞迁移与侵袭作用.
关键词： 二烯丙基二硫 结肠癌SW480细胞 LIMK1 RNA干扰 迁移与侵袭 -
Kiss-1对结肠癌SW480细胞增殖的影响
目的：以结肠癌细胞SW480为模型，探讨Kiss-1基因过表达对结肠癌细胞增殖的影响。方法将人结肠癌细胞株SW480培养后随机分为3组：阴性对照组（转染pEGFP-N1空载体）、实验组（转染pEGFP-N1-Kiss-1）及空白对照组（未转染）。实验组采用脂质体转染的方法将pEGFP-N1-Kiss-1重组质粒转染至SW480细胞，上调结肠癌细胞中Kiss-1的表达水平，经G418筛选出稳定表达株。采用 Western-blot检测转染后细胞中Kiss-1的表达，采用CCK8试验分析Kiss-1对SW480细胞增殖的抑制效果。结果成功将pEGFP-N1-Kiss-1重组质粒转染至SW480结肠癌细胞。 Kiss-1在实验组中高表达，而在空白对照组及阴性对照组中低表达，3组比较差异有统计学意义（P＜0.05）；培养48、72 h后，实验组SW480细胞数均明显低于空白对照组与阴性对照组（P<0.05），而空白对照组与阴性对照组SW480细胞数差异无统计学意义（P>0.05）。结论 Kiss-1基因在SW480-Kiss-1细胞中能稳定、高效地表达；Kiss-1可抑制结肠癌细胞的增殖。
关键词： 结肠癌SW480细胞 Kiss-1 增殖 -
藤黄酸对人结肠癌LOVO、SW480细胞端粒酶的抑制作用
目的 探讨藤黄酸(GA)对人结肠癌LOVO、SW480细胞端粒酶的抑制作用及可能机制.方法 用不同浓度的藤黄酸作用体外生长的人结肠癌LOVO、SW480细胞,采用CCK-8法检测两株细胞增殖抑制率,蛋白质印迹法(Western blot)检测两株细胞hTERT蛋白表达,实时荧光定量QRT-PCR法检测hTERT mRNA表达.结果 藤黄酸对人结肠癌LOVO、SW480细胞具有显著抑制增殖作用,并呈现明显的浓度及时间依赖性(P＜0.05或P＜0.01);Western blot结果显示,藤黄酸能降低LOVO、SW480细胞hTERT蛋白的表达,且呈浓度依赖性(P＜0.05或P＜0.01);QRT-PCR测定显示,藤黄酸能降低LOVO、SW480细胞hTERTmRNA的表达,呈浓度依赖性(P＜0.05或P＜0.01).结论 藤黄酸能够显著抑制人结肠癌LOVO、SW480细胞的增殖,其机制可能是通过下调hTERT mRNA的表达而有效地抑制癌细胞端粒酶活性.
关键词： 藤黄酸 结肠癌LoVo细胞 结肠癌SW480细胞 端粒酶 人端粒酶逆转录酶 -
Kiss-1高表达抑制结肠癌侵袭与转移能力的影响
目的：探讨Kiss-1高表达对结肠癌SW480细胞侵袭与转移能力的影响,初步明确Kiss-1基因对基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)和 MMP-2表达的影响。方法用脂质体转染方法将质粒pEGFP-N1-Kiss-1及pEGFP-N1空载体质粒瞬时导入结肠癌SW480细胞,细胞随机分三组：空白对照组、阴性对照组、实验组。应用Transwell实验检测结肠癌细胞的侵袭能力、Western-blot和Real-time PCR分别从蛋白和mRNA水平检测Kiss-1表达对MMP-9、MMP-2表达的影响。结果成功将pEGFP-N1-Kiss-1重组质粒瞬时导入结肠癌SW480细胞。 Transwell实验检测出实验组较阴性对照组和空白对照组能明显降低SW480细胞侵袭能力的作用(P<0.05)。 Western blot和Real-time PCR检测出实验组Kiss-1蛋白和mRNA表达水平较阴性对照组或空白对照组显著增加,而实验组MMP-9、MMP-2蛋白和mRNA表达水平显著降低,其差异均具有统计学意义(P<0.05)。
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蜂胶黄酮PB3A作用下结肠癌细胞株中miRNA-198和miRNA-296-5p的表达及功能预测
目的: 探讨蜂胶黄酮短叶松素-3-乙酸酯(pinobanksin-3-acetate,PB3A)对结肠癌SW480细胞微小RNA(microRNA, miRNA)表达谱的影响,为结肠癌的治疗及靶向药物研发提供理论依据.方法: 使用miRNA芯片技术分析检测蜂胶黄酮PB3A处理人类结肠癌SW480细胞后miRNA表达谱的变化.通过实时荧光定量PCR方法检测miRNA-198和miRNA-296-5p的表达水平,以此来验证miRNA芯片结果的准确性和可靠性.利用miRWalk、MicroT、miRanda等12个网上数据库预测这2条miRNAs的靶基因并进行靶基因功能富集分析.结果: miRNA芯片分析结果显示,蜂胶黄酮PB3A干预24 h后结肠癌SW480细胞中差异表达倍数在2倍及以上的miRNA有267条,其中差异表达倍数达10倍及以上的miRNA有30条,28条为上调表达,2条下调表达;RT-qPCR实验结果显示miRNA-198和miRNA-296-5p的表达量趋势跟miRNA芯片结果一致,表达差异有统计学意义(P<0.05).miRNA靶基因预测发现miRNA-198有859个靶基因,miRNA-296-5p有906个靶基因;对这些可能被调控的靶基因进行Gene Class分析,结果显示miRNA-198和miRNA-296-5p的靶基因功能主要为转录因子、拷贝数变异、细胞分化、癌基因、蛋白激酶、组蛋白、转移癌基因、肿瘤抑制基因等(P<0.05).信号通路富集分析结果显示,miRNA-198靶基因显著富集于肿瘤通路、Wnt信号通路、胞吞通路、ErbB信号通路、黏着斑通路、黑素生成通路等信号通路,而miRNA-296-5p靶基因在MAPK信号通路、胞吞通路、轴突导向通路、Wnt信号通路、胰岛素信号通路、钙离子信号通路等信号通路中出现聚集(P<0.05).结论: 蜂胶黄酮PB3A 影响结肠癌SW480细胞的miRNA表达谱.PB3A作用下miRNA-198和miRNA-296-5p的异常表达可能参与PB3A抗结肠癌的过程.
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藏药湿生扁蕾对人结肠癌细胞SW480增殖调控因子CyclinD1、CDK4、 PCNA和p21kip1·mRNA表达的影响
目的:探讨藏药湿生扁蕾对人结肠癌细胞SW480增殖调控因子CyclinD1、CDK4、PCNA和p21kip1 · mRNA表达的影响.方法:将SW480细胞接种于6孔培养板,24h后分别用不同浓度(0.25、0.50、1.00 mg/ml)的湿生扁蕾干预,继续培养24h,提取每组总RNA,以GAPDH基因为内参,采用RT-PCR法检测CyclinD1、CDK4、PCNA及p21kip1的mRNA表达水平.结果:PCNA、CyclinD1及CDK4的mRNA表达随湿生扁蕾浓度增加而减少,而p21kip1 mRNA的表达随湿生扁蕾浓度增加而增加,并呈现明显的剂量依赖关系.结论:藏药湿生扁蕾干预SW480细胞的增殖与其抑制CyclinD1、CDK4、PCNA的表达和促进p21 kip1的表达作用有关.
关键词： 藏药湿生扁蕾 结肠癌SW480细胞 增殖调控因子
