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干扰SULT2B1下调MMP-2抑制Hepa1-6肝癌细胞的体外迁移与侵袭
目的 研究羟基类固醇硫酸基转移酶(SULT2B1)对小鼠肝癌细胞Hepa1-6体外迁移与侵袭的影响及分子机制.方法 分别用SULT2B1慢病毒干扰载体和对照载体感染Hepa1-6细胞,设立干扰组和对照组.Transwell法检测细胞的侵袭与迁移能力,Real-time PCR法检测MMP-2、MMP-9和TIMP-2的mRNA水平,明胶酶谱法检测肿瘤条件培养基(TCM)中MMP-2和MMP-9的活性.结果 SULT2B1干扰组穿过未铺和铺Matrigl胶滤膜的细胞数较对照组明显减少(P＜0.05),干扰SULT2B1下调MMP-2、上调TIMP-2的mRNA水平(P＜0.05),干扰SULT2B1的TCM降低MMP-2的活性(P＜0.05).结论 干扰SULT2B1可抑制Hepa1-6细胞的迁移与侵袭能力,其机制主要与降低MMP-2,升高TIMP-2的表达水平有关.
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胃癌KRT17表达及其对上皮间质转化的影响
目的:研究KRT17在胃癌组织、细胞的表达及其对上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)的作用.方法:利用RT-PCR法检测32对配对胃癌及癌旁组织KRT17的表达.用RT-PCR及Western印迹法检测胃癌细胞株与永生化胃黏膜上皮细胞KRT17的表达.免疫组织化学染色法评估227例胃癌组织芯片KRT17表达,结合临床病理资料进行初步分析.Transwell实验观察干扰KRT17的胃癌细胞与对照组细胞迁移、 侵袭能力的差异.RT-PCR及Western印迹法检测EMT标志物E钙黏蛋白、波形蛋白的表达.结果:KRT17在胃癌组织和细胞中表达显著增加,其表达高低与肿瘤组织分级(P=0.008),肿瘤浸润深度(T分期)(P=0.027),淋巴结转移(N分期)(P=0.03)密切相关.干扰KRT17后胃癌细胞迁移和侵袭能力明显下降,E钙黏蛋白的表达明显升高,波形蛋白的表达明显降低.结论:KRT17在胃癌组织中高表达,并与临床病理密切相关.KRT17下调后抑制细胞迁移与侵袭,通过抑制EMT的机制产生作用.
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FRK 通过 FAK 信号通路抑制脑胶质瘤细胞迁移与侵袭作用的研究
目的：研究酪氨酸相关激酶（ fyn-related kinase ， FRK ）是否通过粘着斑激酶（ focal adhesion kinase，FAK）信号通路抑制脑胶质瘤细胞的迁移和侵袭。方法采用Western blot （ WB）检测FRK质粒的转染效果，细胞划痕和Transwell侵袭实验检测过表达FRK及下调FAK对胶质瘤U251细胞迁移和侵袭能力的影响；WB检测过表达FRK对FAK、P-FAK蛋白水平的影响以及下调FAK对FRK蛋白水平的影响。结果FRK质粒转染成功。过表达FRK后胶质瘤U251细胞的迁移与侵袭能力下降。 FAK siRNA干扰效率达到70％，下调FAK后胶质瘤U251细胞的迁移与侵袭能力下降。过表达FRK后P-FAK的蛋白水平明显下降，而FAK蛋白水平无明显变化，下调FAK对FRK的蛋白水平无明显影响。结论 FRK可能通过抑制FAK的磷酸化来调控胶质瘤的侵袭与迁移。
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长链非编码RNA-HOTAIR对子宫内膜癌转移侵袭能力的影响
目的 探讨长链非编码RNA (lncRNA)-HOTAIR对子宫内膜癌细胞增殖和侵袭转移等生物学行为调控作用的影响.方法 收集子宫内膜癌组织标本20例、增生子宫内膜组织标本20例、正常子宫内膜组织标本10例,采用RT-PCR检测lncRNA-HOTAIR在正常子宫内膜组织、增生子宫内膜组织及各期子宫内膜癌组织中的差异表达;利用脂质体Lipofectamine 2000将HOTAIR-siRNA转染Ishikawa细胞;分别采用MTT实验检测各组细胞增殖能力、Transwell小室实验对各组细胞迁移和侵袭能力进行检测.结果 与正常子宫内膜组相比,lncRNA-HOTAIR在各期子宫内膜癌组的基因表达水平显著升高(P＜0.05);ln-cRNA-HOTAIR在单纯性增生子宫内膜组、不典型性增生子宫内膜组的表达水平,差异无显著性(P＞0.05).HOTAIR-siRNA靶向抑制组的细胞增殖水平、侵袭能力与迁移能力显著低于空白对照组与阴性对照组(P＜0.05).结论 lncRNA-HOTAIR参与子宫内膜癌的发生、发展,可能在子宫内膜癌的转移侵袭中起重要作用.
关键词： 子宫肿瘤 子宫内膜癌 lncRNA-HOTAIR siRNA 迁移与侵袭 -
沉默LIMK1促进DADS抑制SW480细胞迁移与侵袭
目的 探讨LIMK1沉默对DADS抑制SW480细胞迁移与侵袭的影响.方法 RNA干扰技术建立稳定LIMK1-miRNA/SW480细胞株;免疫组化和Western blot检测DADS对沉默LIMK1结肠癌SW480细胞LIMK1和磷酸化LIMK1蛋白表达的影响.划痕实验和侵袭实验检测LIMK1 RNA沉默与DADS对SW480细胞迁移与侵袭的影响.结果 RT-PCR与Western blot显示,LIMK1-miR/SW480细胞LIMK1mNRA与蛋白表达明显下调,表明成功构建稳定沉默LIMK1基因的SW480细胞株.免疫组化和Western blot显示,45 mg· L-1 DADS处理和沉默LIMK1组较未转染组与空载体组SW480细胞LIMK1蛋白和磷酸化LIMK1明显下调 (P<0.05).划痕实验和侵袭实验发现,沉默LIMK1或DADS处理SW480细胞的迁移与侵袭能力较未转染组与空载体组明显抑制 (P<0.05).而DADS处理沉默组抑制SW480细胞迁移和侵袭能力更为明显 (P<0.05).结论 沉默LIMK1基因可抑制SW480细胞迁移与侵袭,增强DADS抑制SW480细胞迁移与侵袭作用.
关键词： 二烯丙基二硫 结肠癌SW480细胞 LIMK1 RNA干扰 迁移与侵袭 -
4. 1N蛋白抑制人卵巢透明细胞癌细胞迁移侵袭及其机制初探
目的:探讨4. 1N蛋白对卵巢透明细胞癌细胞迁移和侵袭能力的调控并初步探讨相关分子机制. 方法:应用免疫组化法检测4. 1N蛋白在卵巢透明细胞癌组织中的表达缺失状况. 建立4 . 1 N稳定转染卵巢透明细胞癌ES-2细胞系,通过划痕实验、Tr-answell迁移和侵袭实验观察细胞迁移侵袭能力的改变. 利用qRT-PCR和Western blot法检测紧密连接相关分子(Claudin-4和ZO-1)、上皮-间质转化(EMT)标记物(E-cadherin、N-cadherin和Vimentin)和相关转录因子( Twist、Slug和ZEB-2 )及基质金属蛋白酶( MMP-2和MMP-3 )表达水平的变化. 结果:与卵巢异位的子宫内膜组织相比,卵巢透明细胞癌中4. 1N蛋白表达水平显著降低甚至缺失(P<0. 0001). 过表达4. 1N后,ES-2 细胞的迁移和侵袭能力显著降低, Claudin-4 和ZO-1 表达上调, Twist、Slug、ZEB-2、MMP-2 和MMP-3表达水平下降. 结论:4. 1N在卵巢透明细胞癌细胞中可能通过调控紧密连接蛋白、部分上皮-间质转化转录因子和基质金属蛋白酶的表达水平,抑制癌细胞的迁移和侵袭能力,进而参与负性调控卵巢透明细胞癌的演进.
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ANTXR1对人食管癌ECA109细胞株迁移和侵袭能力的影响
目的 研究炭疽毒素受体1(anthrax toxin receptor 1,ANTXR1)对食管癌细胞系ECA109的迁移及侵袭能力的影响及机制.方法 采用化学合成ANTXR1基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)下调该基因表达,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)和Western blot检测转染后的细胞内ANTXR1、基质金属蛋白酶2(matirx metallo-proteinases 2,MMP 2)和基质金属蛋白酶9(matirx metallo-proteinases 9,MMP 9)的表达,通过细胞划痕实验和Transwell侵袭实验分别检测ANTXR1对ECA109细胞迁移和侵袭的影响. 结果 将ANTXR1转染入ECA109后,细胞中ANTXR1 mRNA和蛋白水平都明显降低,MMP2、MMP9表达明显下调,ECA109细胞的迁移和侵袭能力显著降低,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01).结论 在食管癌细胞系ECA109中ANTXR1与细胞的迁移和侵袭能力相关,ANTXR1可能通过影响MMP2和MMP9的表达参与其中,有望成为食管癌早期诊断、分子治疗的靶点.
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IL-1β诱导肺癌A549细胞CEA过表达对其浸润迁移的影响
目的 探讨IL-1β对肺腺癌A549细胞CEA表达的影响及IL-1β诱导的CEA对肺癌A549细胞迁移侵袭能力的影响. 方法 体外培养的A549细胞分别经IL-1β 50、100和200 ng/ml刺激24 h,Western-blot和免疫细胞化学方法检验CEA蛋白的表达；采用细胞Transwell实验和侵袭实验检测IL-1β诱导的CEA对肺癌A549细胞迁移和侵袭能力的影响. 结果 不同浓度的IL-1β (50、100、200 ng/ml)处理A549细胞后,CEA的表达量较空白对照组增高,且呈剂量依耐性(P＜0.05)；Transwell试验中对照组、100 ng/ml IL-1β组和加兔抗人CEA多抗组穿过Transwell小室膜的细胞数分别为(52.8±5.5)、(117.2±12.2)和(83.6±5.2)个/视野,侵袭试验中对照组、100 ng/ml IL-1β组和加兔抗人CEA多抗组穿过Matrigel胶的细胞数分别为(37.4±6.1)、(92.6±6.7)和(47.8±6.4)个/视野,均为100ng/ml IL-1β组高于对照组(P＜0.05)；加兔抗人CEA多抗组低于100 ng/ml IL-1β组(P＜0.05). 结论 IL-1β可能通过诱导CEA过表达,促进肺癌A549细胞的迁移和侵袭.
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LIMK1在结肠癌中表达与沉默对人结肠癌细胞迁移与侵袭的影响
目的探讨LIMK1在结肠癌中的表达与临床病理参数的关系和沉默LIMK1对人结肠癌SW480细胞迁移与侵袭的影响。方法免疫组化检测LIMK1在结肠癌表达；RNA干扰建立LIMK1-miR/SW480细胞株；RT-PCR与Western blot分别检测LIMK1 mNRA与蛋白及磷酸化LIMK1表达；划痕实验和侵袭实验检测沉默LIMK1对SW480细胞迁移与侵袭的影响。结果免疫组化显示,LIMK1在结肠癌中表达明显高于结肠正常组织,高分化腺癌表达明显低于中分化与低分化腺癌,而低分化高于中分化腺癌；<5.0 cm的结肠癌表达明显低于≥5.0 cm；淋巴结转移显著高于无转移；Dukes分期A+B组表达明显低于C+D组(P<0.05)。 RT-PCR与Western blot显示,LIMK1-miR/SW480细胞LIMK1 mNRA与蛋白表达明显下调,表明成功构建稳定沉默LIMK1基因的SW480细胞。免疫细胞化学证实,沉默组LIMK1表达较未转染组与空载体组明显降低。 Western blot显示,沉默组LIMK1和磷酸化LIMK1较未转染组与空载体组明显下调(P<0.05)。划痕实验显示,沉默组癌细胞迁移率(22.53%)较对照组(76.50%)与空载体组(72.14%)明显降低(P<0.05)。侵袭实验发现,沉默组穿膜细胞(43.67依1.51个)较未处理组(143.33依1.52个)与空载体组(136.34依1.53个)明显减少(P<0.05)。结论 LIMK1表达与结肠癌发生、大小、淋巴结转移及Dukes分期有关。沉默LIMK1基因可抑制人结肠癌SW480细胞迁移与侵袭。
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DADS上调RORα抑制人胃癌MGC803细胞增殖与迁移侵袭
目的研究二烯丙基二硫( DADS)是否通过上调维甲酸相关孤核受体α( RORα)表达抑制人胃癌MGC803细胞增殖、细胞周期与迁移侵袭。方法实验组分为6组,对照组,空载体组, RORα干扰组( miR-RORα),DADS组,空载体联合DADS组,miR-RORα联合DADS组。 Western blot检测RORα、MMP-9与TIMP3蛋白表达。 MTT、流式细胞术、迁移和侵袭实验分别检测细胞增殖、细胞周期与迁移侵袭的改变。结果 DADS处理细胞24 h后,与对照组和空载体组比较,DADS上调RORα和TIMP3、下调MMP-9蛋白表达。干扰组较对照组与空载体组RORα表达明显下调。与DADS处理组比较,干扰RORα表达上调MMP-9、下调TIMP3蛋白表达。 MTT实验显示,DADS抑制MGC803细胞增殖,而干扰RORα表达促进增殖。流式细胞术显示,DADS诱导G2/M期阻滞,下调RORα削弱其作用。迁移实验显示,DADS处理组迁移距离明显减少。 RORα干扰组迁移距离明显高于对照组和空载体组。侵袭实验显示,DADS处理组较对照组和空载体组穿膜细胞明显减少。干扰组穿膜细胞明显多于对照组和空载体组。干扰RORα表达降低DADS对细胞迁移和侵袭的抑制作用。结论 DADS上调TIMP3表达,下调MMP-9表达,抑制MGC803细胞增殖与迁移侵袭,其作用机制与上调RORα表达有关。
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α-倒捻子素对MKN45胃癌细胞增殖、迁移、侵袭和血管生成的影响及其作用机制
目的:探讨α-倒捻子素对人胃癌细胞MKN45增殖、迁移、侵袭和血管生成的影响及其作用机制.方法:MTS法研究α-倒捻子素对人胃癌细胞MKN45增殖的影响;伤口愈合实验及Transwell实验分别用于研究α-倒捻子素对MKN45细胞体外迁移及侵袭的影响;采用大鼠动脉环实验检测α-倒捻子素对MKN45胃癌细胞血管生成的影响;ELISA实验检测α-倒捻子素对MKN45细胞分泌的血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)及碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)表达的影响等;Western blot检测α-倒捻子素对基质金属蛋白酶-2 (matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(matrixmetalloproteinase-9,MMP-9)、神经-钙黏素(N-cadherin)及上皮-钙黏素(E-cadherin)蛋白表达的影响.结果:α-倒捻子素能够明显抑制人胃癌细胞MKN45的增殖,且具有剂量依赖性;α-倒捻子素能够明显抑制MKN45细胞的迁移和侵袭;动脉环实验结果显示α-倒捻子素能够抑制MKN45细胞诱导的血管生成.ELISA结果显示,α--倒捻子素能够抑制VEGF、TNF-α、TGF-β及bFGF的蛋白表达;Western blot结果显示α-倒捻子素能够下调MMP-2、MMP-9及神经-钙黏素的表达,同时上调上皮-钙黏素的表达.结论:α-倒捻子素能够抑制MKN45人胃癌细胞的增殖、迁移、侵袭和血管生成,其发挥作用可能与以下两方面机制相关:①抑制调控肿瘤细胞迁移及血管生成相关蛋白的表达;②抑制MKN45细胞的上皮间质转化.
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过表达OTUD1对结肠癌细胞HCT116增殖和侵袭的影响及机制研究
目的:探讨卵巢癌结构域蛋白酶-1 (ovarian tumor domain-containing protease-1, OTUD1) 基因对人结肠癌细胞HCT116增殖和侵袭的作用及机制.方法:选取低表达OTUD1的人结肠癌细胞株, 利用慢病毒包装技术过表达OTUD1基因, 空载质粒作对照, 嘌呤霉素筛选后构建稳定转染的结肠癌细胞株.RT-PCR (reverse transcription PCR) 和Western blot技术检测转染效率.细胞迁移和侵袭实验检测2组细胞迁移和侵袭能力的改变.细胞增殖实验和流式细胞术检测2组细胞增殖能力的变化.克隆形成实验检测2组细胞的克隆形成能力.Western blot技术分析相关蛋白分子水平的变化, 探讨其可能的机制.结果:6株结肠癌细胞株中HCT116细胞的OTUD1蛋白表达水平低, 并成功构建过表达OTUD1基因的结肠癌细胞株HCT116-OTUD1.与对照组HCT116-Control细胞相比, HCT116-OTUD1细胞株迁移 (P=0.000) 和侵袭能力减弱 (P=0.000) , CCK-8增殖实验显示实验组细胞增殖水平下降 (P=0.004) , EDU流式检测结果显示细胞增殖水平下降 (P=0.000) , 克隆形成能力下降 (P=0.017) .上皮间质转化 (epithelial mesenchymal transition, EMT) 相关分子E-cadherin表达水平上调, Vimentin表达水平下调, 增殖相关信号通路分子p-AKT、p-ERK1/2表达水平下调.结论:过表达OTUD1可以通过减弱细胞的EMT作用来影响其迁移和侵袭能力, 并抑制细胞的增殖能力, 这种变化可能与MAPK/Erk和PI3K/Akt信号通路的激活受到抑制有关.
关键词： 卵巢癌构域蛋白酶-1 结肠癌 上皮间质化 迁移与侵袭 增殖 -
RNAI沉默Grp94基因对人食管癌ECA109细胞迁移及侵袭能力的影响
目的 探讨RNAI沉默Grp94基因表达对人食管癌ECA109细胞迁移及侵袭能力的影响和可能机制.方法 设计、合成靶向Grp94基因的siRNA基因片段,应用脂质体包埋转染食管癌ECA109细胞,采用Real-time PCR和Western blot法分别检测转染后的细胞内Grp94、基质金属蛋白酶MMP2及MMP9的表达,采用Transwell实验检测沉默Grp94基因对细胞迁移及侵袭能力的影响.结果 SiGrp94组中Grp94mRNA和蛋白水平显著下调(P＜0.01),MMP2、MMP9表达明显下调(P＜0.05);SiGrp94组细胞迁移及侵袭能力明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 沉默Grp94基因可明显抑制ECA109细胞的迁移及侵袭能力,Grp94可能通过影响MMP2、MMP9参与其中.
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干扰乳酸脱氢酶A表达对ErbB2高表达乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响
目的 探讨体外干扰乳酸脱氢酶A(LDHA)表达对人类表皮生长因子受体2(ErbB2)高表达乳腺癌SK-BR-3和MDA-MB-453细胞迁移和侵袭的影响及其分子机制.方法 用siLDHA转染(以转染scramblesiRNA为阴性对照)SK-BR-3和MDA-MB-453细胞干扰LDHA的表达;Western blot法检测LDHA蛋白表达水平;Transwell小室检测细胞的迁移和侵袭能力;采用乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒测定细胞的LDH活性;采用葡萄糖和乳酸检测试剂盒分别测定培养基中的葡萄糖浓度和乳酸浓度,计算细胞对葡萄糖的摄取量和乳酸生成量.结果 与阴性对照组比较,siLDHA下调SK-BR-3和MDA-MB-453细胞LDHA的蛋白水平(P＜0.01);降低细胞的迁移和侵袭能力(P＜0.001);下调SK-BR-3细胞的LDH活性,减少两种细胞葡萄糖摄取量和乳酸生成量,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 干扰LDHA表达通过降低糖酵解从而抑制ErbB2高表达乳腺癌细胞的迁移和侵袭.
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β-榄香烯抑制HepG2细胞侵袭及转移的作用机制
目的:研究β-榄香烯(β-elemene)对体外培养的人肝癌细胞HepG2迁移与侵袭能力的影响及可能的作用机制.方法:细胞分为试验组和对照组,试验组细胞给予β-榄香烯处理,对照组细胞不添加任何药物.采用MTT法检测HepG2细胞的活力;分别采用划痕实验、Transwell小室迁移及侵袭实验、细胞-基质黏附实验测定HepG2细胞的体外迁移、侵袭和黏附能力;采用明胶酶谱法及western blot检测HepG2细胞MMP-9酶活性及蛋白表达;采用免疫荧光染色及western blot检测HepG2细胞NF-κB p65核转位的情况.结果:划痕实验、Transwell小室迁移及侵袭实验、细胞-基质黏附实验表明试验组细胞的迁移、侵袭和黏附能力均明显低于对照组(P＜0.05),呈浓度依赖性;明胶酶谱法及western blot表明β-榄香烯能明显降低MMP-9的酶活性及其蛋白表达,呈浓度依赖性;免疫荧光染色及western blot表明与对照组相比,β-榄香烯可以明显抑制HepG2细胞NF-κB p65的核转位,从而抑制其活化,呈浓度依赖性.结论:一定量的β-榄香烯在体外可以抑制HepG2细胞迁移、侵袭和黏附,其机制可能与其通过抑制NF-κB p65活化从而抑制MMP-9的表达有关.
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扶正抗癌方抑制HepG2细胞诱导EMT机理探讨
目的 探讨扶正抗癌方(FZKAF)对体外培养的人肝癌细胞HepG2迁移与侵袭能力的影响及可能的机制.方法 将细胞随机分为实验组和对照组,实验组给予FZKAF处理,对照组不添加任何药物,用MTT法测定两组HepG2细胞的活力,再分别采取细胞-基质黏附实验、划痕实验、Transwell侵袭及迁移实验测定HepG2细胞黏附,侵袭及迁移的能力;后通过明胶酶谱实验测定HepG2细胞内TGF-β1的酶活性.结果 FZKAF能抑制HepG2细胞的增殖,呈浓度依赖性,细胞-基质黏附实验、划痕实验、Transwell侵袭及迁移实验表明实验组细胞的黏附,侵袭及迁移的能力明显低于对照组(P＜0.05);明胶酶谱实验显示,随着FZKAF浓度的增加可以明显抑制HepG2细胞内TGF-β1的酶活性.结论 一定剂量的FZKAF在体外可以抑制HepG2细胞的粘附,迁移和侵袭,其机制可能是通过抑制TGF-β1的酶活性,抑制其表达,从而阻断肿瘤细胞的EMT过程有关.
