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重组弓形虫肌动蛋白解聚因子滴鼻免疫小鼠诱导的免疫应答及保护作用
目的 观察重组弓形虫肌动蛋白解聚因子(Recombinant Toxoplasma gondii actin depolymerizing factor,rTgADF)滴鼻免疫小鼠诱导的免疫应答及抗弓形虫攻击的保护作用. 方法 40只雌性BALB/c小鼠随机分为2组,分别用30 μg rTgADF(溶于20μl PBS)和20μl PBS于第0、14和21d各滴鼻免疫1次.末次免疫后14 d,每组处死小鼠5只,ELISA法测定血清IgA、IgG和IgG1/IgG2a及鼻咽、阴道和小肠冲洗液sIgA以及脾淋巴细胞培养上清中IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10水平.每组另取5只小鼠,用4×104RH株弓形虫速殖子/只灌胃攻击(致死性),观察小鼠健康状况并计算存活率.其余小鼠用1×104速殖子/只灌胃攻击(慢性),攻击后30 d处死,计数肝、脑组织速殖子. 结果 rTgADF诱发小鼠产生较强的系统免疫和黏膜免疫应答,免疫组小鼠血清IgG、IgA和IgG1/IgG2a水平与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01),鼻咽、阴道和小肠冲洗液sIgA水平与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01),脾淋巴细胞培养液上清中IFN-γ和IL-2、IL-4水平与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01),IL-10水平组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).致死性攻击后30 d,对照组小鼠全部死亡,免疫组小鼠存活率为20％,差异有统计学意义(P＜0.01);慢性感染后30 d,免疫组小鼠肝和脑虫荷分别比对照组减少63.87％(P＜0.01)和50.14％(P＜0.05). 结论 rTgADF滴鼻免疫小鼠诱导产生较强的黏膜及系统免疫应答,并可部分抵抗弓形虫致死性和慢性攻击,可作为弓形虫候选蛋白疫苗.
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激素抵抗型哮喘患者对糖皮质激素治疗反应性与其外周静脉血肌动蛋白解聚因子表达水平的相关
目的:分析研讨激素抵抗型哮喘(SRA)患者对糖皮质激素治疗反应性与其外周静脉血肌动蛋白解聚因子(ADF)表达水平的相关性.方法:随机从本院2015年8月-2017年8月收治的支气管哮喘患者中抽取85例作为研究对象,回顾分析其病历资料,患者FEV1％≤75％,其中包含49例激素敏感型哮喘(SSA)患者(SSA组),36例SRA(SRA组),患者均口服泼尼松龙药物治疗.治疗前后测定其外周血ADF和肺功能指标,以及中性粒细胞计数百分比(S-NEU％)、诱导痰嗜酸性细胞(S-EOS％)、中性粒细胞计数百分比(B-NEU％)、嗜酸性粒细胞(B-EOS％),统计整理患者各项指标,如年龄、体重、糖尿病史、家族疾病史等,分析其相关性.结果:治疗前后,SRA组ADF均高于SSA组(P<0.05);SSA组治疗后低于治疗前(P<0.05),SRA组治疗后虽低于治疗前,但差异无统计学意义(P>0.05).治疗后,SRA组S-NEU％、S-EOS％、B-EOS％、B-NEU％均高于SSA组,差异均有统计学意义(P<0.05).治疗后ADF指标与FEV1％呈负相关(P<0.05),与PEF％、S-NEU％均呈正相关(P<0.05);治疗后,ADF与S-EOS％、B-NEU％、B-EOS％均无明显关系(P>0.05).Logistic回归分析,影响哮喘患者发生激素抵抗因素包含高血脂、糖尿病史、高血压史、激素使用时间、激素抵抗型家族史.结论:临床可用ADF指标预测SRA患者对糖皮质激素治疗的反应性,此两者之间存在一定关联,且高血脂、糖尿病史、高血压史、激素使用时间、激素抵抗型家族史为影响哮喘患者发生激素抵抗型的独立危险因素.
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DADS下调肌动蛋白解聚因子抑制人结肠癌SW480细胞迁移与侵袭
目的:研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)对人结肠癌SW480细胞肌动蛋白解聚因子(actin depolymerizingfactor,ADF)表达及肿瘤细胞增殖、迁移与侵袭能力的影响.方法:MTT、划痕愈合和侵袭实验分别检测DADS对SW480细胞增殖、迁移与侵袭的影响;RT-PCR、Western blot检测DADS对SW480细胞destrin与cofilin1表达的作用.结果:MTT分析显示,不同浓度DADS处理SW480细胞24、48、72、96 h后,可呈时间-剂量依赖性抑制SW480细胞增殖(P<0.05).划痕愈合实验显示,20、30、40、50 mg/L DADS处理48h后,细胞迁移率分别为55.51%、34.72%、23.23%、12.87%,较对照组75.86%与DMSO组72.58%明显降低(P<0.05),表明DADS呈浓度依赖性抑制SW480细胞迁移.Transwell侵袭显示,20、30、40、50 mg/L DADS作用24 h后,穿膜细胞数呈剂量依赖性分别减少34.67%、50.54%、57.12%、64.59%(P<0.05).45mg/L DADS处理SW480细胞24、48 h后,destrinmRNA下调24.7%、60.1%,蛋白下调30.1%、58.9%(P<0.05),而处理前后cofilin1 mRNA与蛋白表达无显著性差异(P>0.05).但SW480细胞处理1、15、30、60 min后,p-cofilin1表达呈时间依赖性分别下调18.9%、53.8%、62.1%、78.2%(P<0.05).结论:DADS抑制人结肠癌SW480细胞迁移与侵袭可能与下调destrin和p-cofilin1有关.
关键词： 二烯丙基二硫 结肠癌SW480细胞 肌动蛋白解聚因子 迁移 侵袭 -
TGF-β1通过F-actin聚合促进乳腺癌细胞MCF-7发生上皮-间质转化
上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是上皮细胞失去极性,获得间质形态的一个过程[1].肿瘤细胞中,EMT的激活促进了肿瘤的侵袭转移.转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1) 属于TGF家族,它能够调节细胞增殖、分化、细胞凋亡及细胞外基质的生成等[2].在生理和病理状态下,TGF-β1都是EMT发生的主要诱导因子之一.本文通过TGF-β1诱导乳腺癌细胞MCF-7,检测细胞中EMT相关蛋白vimentin、E-cadherin的表达,F-actin的聚合情况以及LIMK、cofilin的磷酸化水平,进一步阐明TGF-β1促进乳腺癌细胞MCF-7 EMT的分子机制.
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刚地弓形虫肌动蛋白解聚因子/丝切蛋白家族的研究进展
肌动蛋白解聚因子(actin depolymerizing factor,ADF)/丝切蛋白(cofilin)家族是一类肌动蛋白结合蛋白(actinbinding proteins,ABP),其家族成员均可与肌动蛋白结合,具有促进微丝解聚的作用,从而提高肌动蛋白单体水平,在重塑肌动蛋白骨架中起重要作用.ADF在顶端复合门寄生虫侵入宿主细胞过程中扮演重要角色.本文综述了刚地弓形虫ADF/cofilin家族的结构特点、调控肌动蛋白动力学机制、参与弓形虫侵入宿主及其在抗弓形虫感染等方面的作用.
关键词： 刚地弓形虫 肌动蛋白解聚因子 丝切蛋白 ADF/cofilin家族 -
激素抵抗型哮喘治疗反应性与肌动蛋白解聚因子表达的相关性分析
目的 分析激素抵抗型哮喘(SRA)患者对糖皮质激素治疗反应性与其外周静脉血肌动蛋白解聚因子(ADF)表达水平的相关性.方法 收集FEV1％ ≤75％的支气管哮喘患者120例作为研究对象,包括SRA患者13例、激素敏感型哮喘(SSA)患者107例.治疗前填写ACQ5量表,行肺功能检查,记录白天、夜间症状评分,检测诱导痰、外周血嗜酸性粒细胞和中性粒细胞计数百分比(S-EOS％、B-EOS％、S-NEU％、B-NEU％)及外周静脉血ADF的表达水平.所有患者均给予足量(40 mg/d)、足疗程(2周)泼尼松龙口服治疗,治疗后再行肺功能、外周血ADF水平检测.比较治疗前后SRA组与SSA组患者各项指标的差异,并分析ADF水平与肺功能、嗜酸性粒细胞和中性粒细胞计数等的相关性.结果 治疗前SRA组与SSA组ACQ5评分、白天症状评分、夜间症状评分、S-EOS％、B-NEU％、B-EOS％比较差异无统计学意义(P＞0.05),而SRA组S-NEU％显著高于SSA组(P＜0.05).治疗前,SRA组与SSA组FEV1％、PEF％差异无统计学意义(P＞0.05).治疗后SSA组FEV1％、PEF％均明显升高(P＜0.05),而SRA组FEV1％、PEF％无明显变化(P＞0.05).治疗前SRA组患者ADF表达水平显著高于SSA组(P＜0.05).治疗后SSA组ADF表达水平显著下降(P＜0.05),而SRA组患者ADF表达水平无明显变化(P＞0.05).治疗前外周血ADF表达水平与B-EOS％、B-NEU％、S-EOS％均无明显相关性(r=0.27、0.09、-0.23,P=0.20、0.68、0.31).治疗前外周血ADF表达水平与△FEV 1％呈负相关,而与S-NEU％及△PEF％呈正相关(r=-0.40、0.41、0.39,P=0.03、0.02、0.04).结论 ADF水平与哮喘患者糖皮质激素治疗的反应性相关,ADF水平可能作为SRA患者对糖皮质激素治疗反应性的预测因子.
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肌动蛋白解聚因子与细胞伪足及肿瘤侵袭转移的关系
恶性肿瘤的特征之一就是侵袭转移.肿瘤侵袭转移是一个多因素、多基因共同参与的复杂过程.很多研究证实,在肿瘤细胞侵袭转移的早期都会形成各种伪足(如丝状伪足、片状伪足、侵袭性伪足、足体等),其中侵袭性伪足备受关注[1].伪足的形成依赖于肌动蛋白聚合与解聚,而肌动蛋白聚合与解聚受肌动蛋白解聚因子(actin depolymerizing factor,ADF)/cofilin的精细调控.
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新生大鼠肾脏缺血性损伤致肾小管上皮细胞ADF与G-actin的改变
目的了解ADF和G-actin在新生大鼠肾脏缺血损伤中的变化情况,探讨ADF对肌动蛋白细胞骨架的影响机理及其在损伤发病机制中所起的作用.方法新生大鼠分为缺血10 min组、缺血30 min组和对照组,每组各8只.通过钳夹肾蒂不同时段,建立新生大鼠肾脏缺血动物模型.同一张肾脏组织切片上,同时使用兔抗鸡ADF抗血清和鼠G-actin单克隆抗体,通过FITC和TRITC标记的不同二抗检测实验组和对照组ADF和G-actin在肾小管上皮纽胞的表达情况.结果对照组ADF和G-actin染色均匀地分散在肾小管上皮细胞胞浆内.缺血损伤后,ADF和G-actin的分布发生明显变化,出现在TEC顶侧区的聚集,同时肾小管腔颗粒中也出现两者的染色.ADF的表达在缺血前后差异无统计学意义(P＞0.05),G-actin的表达在缺血后出现增加,差异有统计学意义(P＞0.05).结论生理情况下,ADF和G-actin在肾小管上皮细胞内呈弥散分布.缺血损伤使ADF激活并向顶侧区聚集,解聚微绒毛轴心的F-actin束,出现该处G-actin的浓集,造成微绒毛肌动蛋白骨架的破坏,出现微绒毛的断裂、脱落等病理变化.
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cofilin蛋白的调节机制对神经系统的影响
细胞骨架中的肌动蛋白参与了一系列的重要生理活动,包括肌肉收缩、胞质分裂、神经纤维再生与退行性改变等.这些生理过程的实现除了需要肌动蛋白参与,还需要一些能够起到调节肌动蛋白聚合和解聚作用的蛋白.根据近的研究表明,分子量为15 ～20 kDa的肌动蛋白解聚因子/丝切蛋白分子家族(ADF/cofilin family)如肌动蛋白解聚因子(actin depolymerizing factor,ADF)、丝切蛋白(cofilin)、抑制蛋白(profilin)、载肌动蛋白(actophorin)等能够在一定条件下起到使肌动蛋白微丝解聚的作用,从而影响细胞骨架蛋白动力学.
