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脂蛋白相关性磷脂酶A2的临床研究新进展
动脉粥样硬化性心血管疾病属于临床上致残及致死的主要原因,除了血脂异常之外,氧化应激与炎症均属于动脉粥样硬化发生与发展的主要机制.脂蛋白相关性磷脂酶A2(Lp-PLA2)属于具有血管特异性的炎症标志物,若能够全面掌握其相关知识,在诊断高危心脑血管疾病患者中具有重要意义.本文对此展开综述,分析脂蛋白相关性磷脂酶A2的生物学特征、检测方式以及与动脉粥样硬化的相关性.
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肺炎患儿血清IL-8、IL-17、磷脂酶A2的表达及临床意义
目的:探讨肺炎患儿血清IL-8、IL-17、磷脂酶A2 (Phospholipase A2,PLA2)的表达及临床意义.方法:选择2011年1月至2013年12月期间90例肺炎患儿为研究对象.将90例肺炎患儿按照临床症状分为喘息性肺炎(52例)和非喘息性肺炎(38例).喘息性肺炎:病程＞10 d 20例,病程≤10 d 32例.52例喘息性肺炎按照病原学检测结果,呼吸道合胞病毒感染28例,肺炎支原体感染24例.另选择健康儿童50例为对照组.统计受试者血清IL8、IL-17、PLA2水平,并对血清IL-8、IL-17、PLA2水平与年龄、性别、肺炎病程、肺炎病因、肺炎症状进行相关性分析.结果:喘息性肺炎血清IL8、IL-17、PLA2水平均高于非喘息性肺炎、健康对照组,差异有统计学意义;非喘息性肺炎患儿血清IL-8、IL 17、PLA2水平高于健康对照组,两组比较有统计学意义;喘息性肺炎不同病因患儿血清IL-8、IL-17、PLA2水平均高于健康对照组,差异有统计学意义;但喘息性肺炎不同病因之间血清IL-8、IL-17、PLA2水平比较无统计学意义;喘息性肺炎病程＞10 d患儿血清IL-8、IL-17、PLA2水平均高于病程≤10d、健康对照组,差异有统计学意义;血清IL-8、IL-17、PLA2水平与肺炎病程、肺炎症状呈正相关;血清IL-8、IL-17、PLA2等指标与年龄、性别、肺炎病因等因素无明显相关性.结论:IL-8、IL-17、PLA2在肺炎患儿血清中呈高表达;IL-8、IL-17、PLA2与肺炎症状及病程进展密切相关.
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二十五味珊瑚胶囊对退变颈椎间盘组织磷脂酶A2的影响
目的 观察二十五味珊瑚胶囊对模型动物退变颈椎间盘组织磷脂酶A2 (PLA2)活性的影响,探讨二十五味珊瑚胶囊治疗颈椎病的作用机理.方法 SD大鼠(SPF) 60只,随机抽签分为对照组(15只)、模型对照组(15只)、模型服药1组(15只),模型服药2组(15只)；模型服药1、2组分别给予二十五味珊瑚胶囊粉剂0.33×5g/kg、0.66×5g/kg,加蒸馏水1ml稀释灌胃给药,1次/d,持续90 d.选用动力失衡性颈椎病动物模型,90 d后取C4～5颈椎间盘,采用催化活性与微孔比色相结合的方法测定PLA2活性.结果 模型组颈椎间盘PLA2活性(12.37±4.21)IU/mg·min-1,明显高于对照组(2.56±1.19) IU/mg·min-1 (P＜ 0.05).模型服药1组、模型服药2组颈椎间盘PLA2活性分别为(8.56±2.13) IU/mg·min-1、(5.58±2.39) IU/mg·min-1,均低于模型对照组(12.37±4.21) IU/mg· min-1(P均＜0.01).结论 二十五味珊瑚胶囊可下调退变颈椎间盘中PLA2的活性,可减少多种炎症介质的合成.
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注射用胶原酶对磷脂酶A2活性抑制作用的体外实验研究
目的:研究注射用胶原酶对炎性物质磷脂酶A2(PLA2)的水解作用和对其活性的抑制作用.方法:制备不连续SDS-PAGE垂直平板凝胶,将3种酶促反应体系的不同酶解时间的反应液样品,进行电泳、固定、染色、脱色.同时在PLA2活性测定体系中,加入定量的胶原酶溶液,测定各反应体系的PLA2活性相当值.以不含胶原酶的PLA2活性测定体系为标准,求出不同活性单位胶原酶体系的PLA2相对活性,并依据实验所获得的数据,绘制Lineweaver-Burk图加以识别.通过对注射用胶原酶在PLA2水解卵磷脂过程中所起的作用,确定注射用胶原酶对PLA2活性的抑制机制.结果:注射用胶原酶对PLA2无水解作用,但在体外对PLA2的活性有明显的抑制作用,其抑制类型为竞争性抑制,且抑制作用随胶原酶剂量的增加而增强.结论:虽然注射用胶原酶在体外对炎性物质PLA2的活性有明显的抑制作用,但根据酶促反应动力学的基本理论,"针抵患处、酶达底物"是构成化学溶解术这一微创技术的基本要素和应用该技术时必须遵守的基本原则.
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基于配伍理论的芪麝方对神经根压迫模型大鼠背根节神经元磷脂酶A2及前列腺素E2表达的影响
目的:观察芪麝方拆方后不同配伍组别不同给药时长对神经根压迫模型大鼠背根节神经元(DRG)内磷脂酶A2(PLA2)、前列腺素E2(PGE2)含量表达的影响,并进一步探讨芪麝方的配伍规律.方法:选用3月龄SPF级SD雄性大鼠352只,随机分为11组,[君组(J)、君臣组(JC)、君佐组(JZ)、君使组(JS)、君臣佐组(JCZ)、君臣使组(JCS)、君佐使组(JZS)、君臣佐使组(JCZS)、正常组(KB)、阳性对照组(YD)、模型组(MX)],根据芪麝方及阳性对照药成人每日常用剂量及芪麝方处方配比并按“动物体表面积比率换算等剂量方法”换算给药剂量,每天灌服1次,各组别分别于给药1,2,3,4周取背根节,应用ELISA法检测神经根组织中PLA2和PGE2的含量.测定结果应用SPSS 18.0进行统计学比较,通过差异对比找出引起炎症变化的敏感组分.从而揭示芪麝方各配伍组分抑制炎症的相互作用规律.结果:模型组与正常组比较,两炎症因子水平显著高于正常组,并在4周内变化趋势稳定,进一步验证了该模型的稳定性.不同给药时长不同配伍组别相对于模型组均能显著降低模型大鼠背根节中PLA2,PGE2含量(P＜0.01),其中不同组别之间抑制炎症的程度各有不同(P＜0.05),说明各配伍组分间存在协同作用.结论:统计结果显示复方中君药起到主导药效的作用,臣、佐、使对君药有协同增强疗效的作用,其他各组别虽作用效果明显,但尤以全方配伍效果佳,说明全方配伍的科学性和合理性.为制剂的科学配伍提供了数据依据.
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青蒿总香豆素抗热应激作用及其机理的研究
目的:研究青蒿抗热应激作用及其机理.方法:利用高温高湿环境造成家兔热应激模型,观察青蒿总香豆素对家兔肛温上升及血液、肺组织磷脂酶A2活性和循环内皮细胞数目的变化,并测定其对脑、心脏、肾组织钠泵活性及小鼠抗脑缺氧能力的影响.结果:青蒿总香豆素可明显降低热应激家兔体温上升速度,并伴随血清、肺组织磷脂酶A2活性降低,循环内皮细胞减少,显著抑制脑、心、肾组织钠泵活性,延长断头小鼠张口喘气时间几近1倍.结论:香豆素部位可能是青蒿祛暑功效的活性成分群之一.
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清胰汤对大鼠急性出血坏死性胰腺炎模型肺损伤的治疗机理研究
目的:研究清胰汤(QYT)对大鼠急性出血坏死性胰腺炎(AHNP)肺损伤的治疗机理.方法:Wistar大鼠经胆胰管逆行注射5%牛磺胆酸钠(1mL/kg,0.1mL/min)诱发AHNP;QYT组在造模后30min灌胃QYT(10mL/kg);善宁组在造模后30min皮下注射善宁(50μg/kg).每组又分别随机分为3、6、12h三组(每组8只),其余12只用于观察24小时死亡率.于不同时间点测定血清淀粉酶(AMY)、脂肪酶(LIP)、磷脂酶A2(PLA2)、肿瘤坏死因子(TNFα);测定肺组织髓过氧化物酶(MPO)、PLA2、TNFα;提取肺泡灌洗液巨噬细胞核蛋白,ELISA法检测核因子(NF-κBP65)表达;对肺、胰腺组织行病理检查.结果:QYT明显降低AHNP大鼠死亡率;减轻肺、胰腺病理损伤;降低血清、肺组织PLA2、TNFα水平;显著降低肺泡巨噬细胞NF-κ B活性.结论:清胰汤可通过其多途径多靶点作用,抑制PLA2活性,抑制肺内炎症相关细胞NF-κB活化,下调多种细胞因子表达,减轻肺损害,降低死亡率.
关键词： 清胰汤 急性出血坏死性胰腺炎肺损伤 磷脂酶A2 NF-κ B 细胞因子 善宁 吡咯烷二硫代氨基甲酸盐 -
电针环跳穴对腰椎间盘突出症家兔髓核组织PGE2、PLA2和IL-1α的影响
目的:观察电针环跳穴对腰椎间盘突出症( L1DP)家兔髓核炎性分子的影响,探讨电针环跳对LIDP家兔的损伤修复机制.方法:将40只家兔随机分为空白组、模型组、环跳组和非穴组,每组10只.采用自制的LIDP动物病理模型造模器建立家兔LIDP病理模型,放射免疫法测定家兔髓核前列腺素E2(PGE2)含量和磷脂酶A2( PLA2)活性的变化,酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定家兔髓核白介素-1α(IL-1 α)含量的变化.结果:模型组髓核PGE2、PLA2和IL-1 α含量或活性均显著高于空白组(P＜0.05,P＜0.01)；环跳组髓核PGE2、PLA2和IL-1α含量或活性显著低于模型组和非穴组(P＜0.05,P＜0.01)；而非穴组髓核PGE2、PLA2和IL-1α含量或活性与模型组比较无显著性差异.结论:电针环跳穴可降低LIDP家兔髓核PGE2、PLA2和IL-1 α的含量或活性.
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蛇伤外敷散超微散剂对蝮蛇咬伤大鼠血清HAase、PLA2的影响
目的:观察蛇伤外敷散超微散剂对蝮蛇咬伤大鼠血清透明质酸酶(HAase)、磷脂酶A2(PLA2)的含量及症状积分的影响.方法:将40只SD大鼠随机分成空白对照组、普通散剂组、超微散剂组、阳性对照组.通过皮下注射蝮蛇毒的方法造模,通过ELISA法检测各组大鼠血清HAase、PLA2的含量和观察各组症状积分变化.结果:造模后各组HAase、PLA2含量显著超过造模前(P＜0.05),涂药后普通散剂组,超微散剂组,阳性对照组HAase、PLA2含量显著亦显著降低(P＜0.05),症状积分亦显著降低(P＜0.05).其中,以超微散剂组治疗7d后对HAase、PLA2含量及症状积分降低效果佳,与普通散剂组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:蛇伤外敷散超微散剂可以显著降低蝮蛇咬伤大鼠血清HAase、PLA2含量及症状积分,值得临床推广.
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腰椎间盘突出症疼痛原因探讨
目的 探讨腰椎间盘突出症疼痛可能的原因.方法 用微量酸滴定法测定椎间盘、黄韧带和硬膜外脂肪中PLA2活性.结果 腰椎间盘突出症患者椎间盘、黄韧带和硬膜外脂肪中PLA2活性升高均有显著性意义(三者P均<0.001)且三者间均有相关性(r椎,黄=0.6863,P=0.001:r椎,硬=0.7388,P<0.001;r黄,硬=0.6113,P<0.05).结论 椎间盘退变的病理变化不仅发生在椎间盘本身,还涉及同一节段的黄韧带和硬膜外脂肪,是它们中活性异常升高的PLA2共同作用神经根而致痛的.
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消痰通腑方对结肠癌SW480细胞磷脂酶A2、环氧合酶2表达及细胞生物学行为的影响
目的 观察消痰通腑方对结肠癌SW480细胞增殖、迁移的影响,探讨其分子作用机制.方法 采用不同浓度消痰通腑方作用结肠癌SW480细胞,CCK8法和平板克隆形成实验检测细胞增殖,Transwell小室实验检测细胞迁移能力,RT-qPCR检测磷脂酶A2(PLA2)和环氧合酶2(COX-2) mRNA表达,Western blot检测PLA2和COX2蛋白表达,RNA干扰技术沉默SW480细胞株中PLA2基因表达.结果 消痰通腑方低、高剂量组较对照组结肠癌SW480细胞增殖能力明显减弱(P＜0.05),克隆形成率及迁移能力明显下降(P＜0.05,P＜ 0.01),PLA2、COX-2 mRNA和蛋白表达均明显下调(P＜0.05),并呈浓度依赖性;与质粒对照组和对照组比较,PLA2 shRNA干扰组细胞PLA2和COX2蛋白表达明显下调(P＜0.05).结论 消痰通腑方可抑制结肠癌SW480细胞增殖和迁移,其机制可能与PLA2及COX-2的表达下调有关.
关键词： 消痰通腑方 磷脂酶A2 环氧合酶2 结肠癌SW480细胞 -
益心康胶囊对大鼠心肌线粒体结构及功能损伤的保护作用
目的:观察了异丙肾上腺素（ISO）对大鼠心肌线粒体结构和功能的损伤，评价益心康胶囊（H303）对损伤的保护作用。方法：ISO损伤，分离心肌线粒体，测定磷脂酶A2（PLA2）活性、膜磷脂（PL）含量、膜脂流动性（LFU），Ca2+-ATPase活性、线粒体呼吸功能及心肌组织高能磷酸化合物。结果：ISO可导致线粒体产生严重损伤，表现为PLA2激活，PL含量减少；LFU降低；Ca2+-ATPase活性降低；线粒体呼吸功能降低；心肌组织高能磷酸化合物明显降低。H303预先口服给药可明显改善线粒体的损伤。表现为PLA2活性降低， PL含量增加；明显改善LFU；保护线粒体Ca2+-ATPase活性；通过加快Ⅲ态呼吸速率、改善ADP/O比值、恢复降低的呼吸控制率而保护线粒体呼吸功能。结论： H303对ISO所致的线粒体结构和功能损伤具有明显的保护作用。
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白藜芦醇苷对大鼠肺间质纤维化的防治作用
目的:建立博来霉素(BLM)诱导的大鼠肺间质纤维化的动物模型,分别给予3种剂量的白藜芦醇苷(PD),观察PD对大鼠肺间质纤维化的防治作用并探讨其可能的作用机制.方法:192只3月龄健康SD大鼠,随机分为正常对照组(A组),肺纤维化模型组(B组),PD低剂量组(C组),PD中剂量组(D组),PD高剂量组(E组),地塞米松组(F组).每组于第3,7,14,28天各随机处死8只.光镜下观察肺组织形态学变化；观察肺组织匀浆中羟脯氨酸(HyP)含量,PLA2活性及支气管肺泡灌洗液(BALF)中前列腺素E2(PGE2),白三烯C4(LTC4)和转化生长因子-β1(TGF-)含量变化.结果:第3,7,14,28天,模型组肺组织匀浆中PLA2活性,BALF中的PGE2,LTC4和TGF-β1含量均较正常组显著增高(P＜0.01),肺组织HyP含量于第7天开始较正常对照组增高(P＜0.05),第28天达高峰；与模型组比较,3种剂量的PD( 10,20,40mg· kg-1·d-1)及地塞米松在各观察时间点均可降低肺组织匀浆中PLA2活性和HyP含量及BALF中的PGE2,LTC4和TGF-β1含量(P＜0.05)；PD组间比较差异有统计学意义(P＜0.05),其中上述指标E组低于D组,D组低于C组；E组与地塞米松组差异无统计学意义；但上述观察指标仍高于正常组(P＜0.01).病理组织形态学提示,PD各组及地塞米松组肺泡炎及肺纤维化程度较轻.结论:PD具有抑制肺间质纤维化的作用,但不能完全阻止其进展过程.
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蛇血清分泌型磷脂酶A2抑制剂防治人炎症的生物信息学分析
目的 比较人和蛇毒分泌型磷脂酶A2(sPLA2)结构相似性,分析蛇血清磷脂酶A2抑制剂(PLI)对sPLA2特异性抑制的结构与功能关系,评价蛇血清PLI对人炎症的抑制作用.方法 用Clustal W2对人和五步蛇sPLA2氨基酸序列进行多重序列比对.用Swiss-model对各种sPLA2的空间结构进行同源建模预测,并用Chimera软件对人和蛇毒sPLA2空间结构进行三维比对.结果 人和五步蛇sPLA2一级序列同源性有40%左右,空间结构几乎相似.各种PLI具有相同的空间结构特征和保守的sPLA2结合区.结论 理论上推断蛇血PLI可有效抑制人sPLA2活性,减少sPLA2介导的炎症发生.
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人重症胸腹损伤所致急性凝血功能障碍相关因素的分析
目的 探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、内毒素(LPS)、磷脂酶A2(PLA2)和血小板活化因子(PAF)与重症胸腹损伤凝血功能障碍的相关性.方法 收集2009年1月至2012年6月在解放军第253医院就诊,创伤指数≥17分,除外合并颅脑损伤及急诊死亡的胸腹损伤患者82例,在救治同时检查血小板计数(PLT)、血浆D-二聚体(D-D)、凝血酶时间(TT)、TNF-α、LPS、PLA2和PAF,对结果进行相关性检验.结果 PLT:83.4 ±38.5(109/L),D-D:1 824±608(U/L),TT:58.3±12.4(s);TNF-α:36.4±18.1(ng/mL),LPS:344±106 (IU/L),PLA2:41.4±14.3 (ng/mL),PAF:15 765±4 432 (ng/L).PLT与TNF-α、LPS、PLA2、PAF之间相关系数(r)均小于-0.881,显著负相关,D-D、TT与TNF-α、LPS、PLA2、PAF之间r均大于0.917,显著正相关.结论 TNF-α、LPS、PLA2、PAF可能参与了胸腹损伤凝血功能障碍的发生.对TNF-α、LPS、PLA2、PAF早期干预,或可改善伤者的凝血功能,提高生存率.
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新生儿休克时血清磷脂酶A2的水平变化及其临床意义
目的探讨新生儿休克时血清磷脂酶A2(PLA2)的水平变化及其在休克发生发展中的作用及意义.方法运用酶联免疫吸附法(ELISA)测定16例新生儿休克患儿[6例单器官衰竭(SOF)和10例多器官功能衰竭(MSOF)]的PLA2水平及测量血小板计数、动脉血氧、乳酸,同期测量20例健康新生儿为对照.结果休克组新生儿PLA2水平明显高于对照组(p＜0.01),MSOF组PLA2水平明显高于SOF组(p＜0.01).结论血清PLA2与新生儿休克的严重程度明显相关,对评估新生儿休克的预后和转归有重要临床意义.
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蛇毒磷脂酶A2的研究
1 磷脂酶A2的一般性质磷脂酶A2(PLA2,E.C.3.1.1.4) 专一催化3-Sn-甘油磷脂2位酰脂键的水解反应,生成1-酰基溶血磷脂和脂肪酸[1].它广泛存在于生物体内,尤其富含于哺乳动物胰脏的分泌液和蛇与昆虫的毒液中.
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广西眼镜王蛇毒杂合性酸性磷脂酶A2的基因克隆与序列分析
目的研究广西眼镜王蛇毒杂合性酸性磷脂酶A2(APLA2)的基因克隆与序列分析.方法从广西眼镜王蛇毒腺中提取总RNA,根据种属关系接近的台湾眼镜蛇毒APLA2两端非翻译区的保守序列设计引物,利用RT-PCR进行体外扩增,获得磷脂酶A2基因,克隆至pMD18-T载体,经测序筛选出APLA2-1,APLA2-2及一个新的酸性磷脂酶A2(命名为APLA2-3).根据测序结果确定了APLA2-3基因的全序列,并由此推导编码的氨基酸序列. 结果利用Antheprot 4.3c蛋白质序列分析软件包计算它的等电点为4.885,相对分子质量为16.543kD,并预测了它的二级结构和部分理化性质.同源性比较表明,APLA2-3的1～39位氨基酸残基序列与APLA2-2相同,其同源性为64%,而40～108位氨基酸残基序列与APLA2-1相同,其同源性为69%,109位氨基酸残基序列皆不同于这两种APLA2.结论 揭示了APLA2具有基因多样性,可能与物种进化和生物活性有关,并为进一步研究PLA2的结构与功能的关系提供更多的信息.
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华支睾吸虫磷脂酶A2基因生物学特性的初步研究
目的 对新发现的华支睾吸虫磷脂酶A2(CsPLA2)基因进行生克隆、原核表达,确定该蛋白是否为成虫分泌/排泄蛋白(excretory-secretory protein,ESP). 方法 利用多种生物信息学分析软件,从华支睾吸虫全长cDNA质粒文库中识别出CsPLA2样基因,分析该基因表达蛋白的生物学功能特征;将CsPLA2克隆入原核表达质粒pET28a(+),并在大肠埃希菌BL21/DE3中诱导表达,蛋白表达产物经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定;应用Western blot确定CsPLA2是否为ESP;应用免疫荧光方法观察CsPLA2在成虫的组织定位. 结果 该基因编码307个氨基酸,含有信号肽序列,具有PLA2功能域和活化位点,与谷蛀虫同源蛋白相比,一致性为45%,相似性为52%.PCR、双酶切及DNA测序结果表明pET28a-CsPLA2重组质粒构建成功,SDS-PAGE显示目的 基因在大肠埃希菌BL21/DE3中高效表达,表达产物为包涵体.Western blot结果表明CsPLA2是华支睾吸虫的ESP组分之一.虫体免疫组织化学定位显示CsPLA2定位于虫体的腹吸盘、肠支、睾丸处. 结论 新发现一个CsPLA2基因,其表达的蛋白定位于虫体的腹吸盘、肠支、睾丸处,为华支睾吸虫成虫ESP组分之一.该基因可在原核表达系统中高效表达.
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人细小病毒B19 VP1独特区蛋白与自身免疫性疾病的研究进展
人细小病毒B19(简称B19病毒)与多种自身免疫性疾病关系密切，这主要缘于其病毒衣壳蛋白。 B19病毒VP1独特区蛋白延伸到病毒衣壳外，有磷脂酶A2位点，含有多个抗原决定簇，可刺激宿主产生自身抗体，诱发和/或加重多种自身免疫性疾病。结合文献和本课题组工作，本文对B19病毒VP1独特区蛋白的生物学特性及其与自身免疫性疾病的关系进行综述，这有助于B19病毒感染的预防和治疗。
