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木瓜提取物对高糖高脂诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝病的影响
目的 观察木瓜提取物对小鼠非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的影响,探讨其可能的分子机制.方法 将40只雄性昆明小鼠随机分成正常组、模型组和药物低(50 mg/kg)、高(100 mg/kg)剂量组.正常组给予普通饲料,其他组给予高糖高脂饲养造模,4周后处死,检测体质量、肝脏质量、血清相关指标及肝脏三酰甘油(TG)水平,HE及油红O染色观察肝脏组织形态,RT-PCR和Western blot检测脂代谢相关基因表达.结果 与正常组比较,模型组小鼠肝脏明显增大,肝指数明显升高(P<0.01),附睾脂肪指数明显升高(P<0.05);血清丙氨酸氨基转移酶和葡萄糖水平升高(P<0.05);肝脏TG水平升高(P<0.05);病理结果显示,肝脏脂肪变性明显;RT-PCR和Western blot结果显示,模型组肝脏组织SIRT1、FoxO1表达水平下调,SERBP-1c表达水平上调.与模型组比较,药物低、高剂量组脂肪肝病理损伤明显改善,肝指数、肝脏TG含量均下降,SIRT1和FoxO1表达水平上调.结论 木瓜提取物对高糖高脂诱导的NAFLD有保护作用,其机制可能是通过SIRT1-FoxO1信号通路发挥作用.
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补骨脂酚对口腔鳞状细胞癌增殖、迁移和凋亡的影响及其机制
目的 探究SIRT1是否介导补骨脂酚对口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)增殖、迁移及凋亡的影响. 方法 将体外培养的OSCC细胞系分为4组:正常(control)组,补骨脂酚处理(BAK)组,补骨脂酚处理+SIRT1抑制剂(BAK+ EX527)组,SIRT1抑制剂(EX527)组.CCK-8法检测EX527和不同剂量BAK(1,2,5,10 μmol/L)对OSCC细胞活力的影响,TUNEL染色检测OSCC细胞凋亡率,Western blot检测蛋白SIRT1、Ac-FOXO1、Bax、Bcl-2和Caspase-3的表达水平,划痕实验检测OSCC细胞迁移能力. 结果 与control组相比,补骨脂酚呈剂量依赖性地抑制OSCC细胞的细胞活力,而补骨脂酚剂量为5 μmol/L时效果佳,因此采用该剂量进行下一步机制研究.与control组相比,BAK组SIRT1、Bax和Caspase 3的表达量、OSCC细胞凋亡率和划痕实验细胞间距明显增加,而Ac-FOXO1、Bcl-2的表达量明显减少.EX527阻断SIRT1信号通路可明显减弱BAK的上述作用(均P＜0.05). 结论补骨脂酚可通过激活SIRT1信号通路,促进OSCC细胞凋亡,抑制OSCC细胞增殖和迁移.
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SIRT1信号通路在高尿酸介导的NAFLD大鼠中的表达及白藜芦醇的干预作用
[目的]探讨白藜芦醇对高尿酸介导的非酒精性脂肪性肝病(nonalcholic fatty liver disease，NAFLD)大鼠血清炎症指标的影响及病理学的改变。[方法]采用改良的高酵母高脂饲料喂养，合并氧嗪酸皮下注射，建立高尿酸介导的NAFLD大鼠模型。36只SPF级雄性SD大鼠，随机分为3组：正常对照组、模型组、白藜芦醇治疗组，每组12只。分别观察白藜芦醇对 NAFLD伴高尿酸大鼠体质量、肝湿重、血清丙氨酸氨基转移酶（ alanine aminotransferase，ALT）、门冬氨酸氨基转移酶（ aspartate transaminase，AST）、肿瘤坏死因子α（ tumor necrosis factor α，TNF-α）、白介素6（ interleukin 6，IL-6）、尿酸（ uric acid，UA）含量的影响，并与正常对照组、模型组比较分析病理学变化，免疫组化检测沉默信息调节因子1（ silent information reg－ulator 1，SIRT1）、环氧化酶2（ cyclooxygenase-2，COX-2）、核转录因子κB（ nuclear factor kappa B，NF-κB）表达情况。[结果]白藜芦醇治疗后，高尿酸介导的NAFLD大鼠肝湿重低于模型组，差异有统计学意义（ P<0.05），血清ALT、AST、TNF-α、IL-6、UA含量降低，差异有统计学意义（ P<0.01），肝组织病理显示脂肪变性及炎性反应较模型组减轻。与模型组比，白藜芦醇治疗组大鼠肝组织中COX-2、NF-κB表达均减弱，差异有统计学意义（ P<0.01），SIRT1表达增强，差异有统计学意义（ P<0.01）。大鼠肝脏脂肪变性和炎症评分与COX-2、NF-κB表达之间存在正相关，与SIRT1表达之间存在负相关(P<0.01)。 COX-2、NF-κB与SIRT1表达之间存在负相关(P<0.01)。[结论]白藜芦醇通过促进伴随高尿酸的NAFLD肝细胞中SIRT1表达，抑制COX-2表达和NF-κB转录活性，阻止炎症细胞因子（如TNF-α、IL-6）介导的细胞毒效应，减轻炎症程度从而发挥治疗 NAFLD的作用。
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五子衍宗丸干预SIRT1信号通路调节肿瘤相关性疲劳的机制研究
目的: 探究五子衍宗丸干预SIRT1 信号通路调节肿瘤相关性疲劳(CRF) 的作用机制.方法: 随机选取10 只BALB/c 裸鼠作为正常对照组,同时通过人乳腺癌MCF-7 细胞构建乳腺癌裸鼠模型,模型构建成功后随机分为模型组、紫杉醇组、五子衍宗丸组、紫杉醇+五子衍宗丸组、SIRT1-shRNA +紫杉醇组、SIRT1-shRNA 组,每组10只,给药期间对小鼠进行肿瘤相关性疲劳实验,同时检测小鼠体质量变化、肿瘤体积及大小变化情况,给药21 d 后处死小鼠,分别取肝脏、肌肉及模型组织分别进行肝糖原、肌糖原和免疫组化检测.结果: 与模型组和紫杉醇组比较,五子衍宗丸组和紫杉醇+五子衍宗丸组小鼠体质量显著升高,肿瘤体积和体质量增长显著降低,力竭游泳时间显著延长,总运动距离、外周格运动距离、中央运动距离、爬壁次数、大便颗粒数、不动时间等行为学指标显著改善,肝糖原和肌糖原显著升高.免疫组化结果显示,SIRT1-shRNA 组、SIRT1-shRNA+紫杉醇组、紫杉醇+五子衍宗丸组模型组织中PIK3、p53 蛋白较模型组和紫杉醇组显著升高,SIRT1 蛋白表达显著降低.其中SIRT1-shRNA+紫杉醇组及紫杉醇+五子衍宗丸组PIK3、p53 蛋白升高更加明显.结论: 补肾名方五子衍宗丸能通过SIRT1 信号通路调节肿瘤的能量代谢,从而发挥治疗CRF 的作用.
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二氢杨梅素上调SIRT1信号通路改善HepG2细胞甘油三酯蓄积
目的 探究二氢杨梅素(dihydromyricetin,DHM)对肝细胞脂质代谢的影响及其与SIRT1信号通路的关系.方法 0.2 mmol/L棕榈酸(palmitic acid,PA)处理HepG2细胞24 h,诱导为脂肪变性肝细胞模型,再用0、5、10、20μmol/L DHM及20 μmol/L DHM+2μmol/L SIRT1抑制剂(EX527)分别干预24 h,CCK-8检测细胞增殖活性,油红0染色检测细胞脂滴形成情况,酶偶联比色法检测甘油三酯(triglyceride,TG)含量,蛋白免疫印迹法检测沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)、腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate activated protein kinase,AMPK)、固醇调节元件结合蛋白1c(sterol regulatory element binding protein-1,SREBP-1c)、脂肪酸合成酶(fatty acid synthetase,FAS)、乙酰辅酶A羧化酶(acetyl-CoA carboxylase,ACC)的表达.结果 0.2 mmol/L PA和5、10、20 μmol/L DHM对细胞增殖活力没有显著影响(P＞0.05);5、10、20 μmol/L DHM处理后明显减少脂肪变性的HepG2细胞脂滴蓄积和甘油三酯含量(P＜0.01),增加磷酸化的AMPK(p-AMPK)和SIRT1的表达水平,并且降低脂质合成相关基因SREBP-lc、FAS、磷酸化的ACC(p-ACC)的蛋白表达,SIRT1抑制剂能显著增加脂肪变性的HepG2细胞的甘油三酯含量(P＜0.01),削弱DHM对脂肪变性HepG2细胞SREBP-1c、FAS、P-ACC表达的抑制作用.结论 DHM通过上调脂肪变性HepG2细胞SIRT1信号通路改善肝细胞脂肪变性.
