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HSPgp96诱导巨噬细胞呼吸爆发与细胞内外游离钙关系的研究
目的:探讨从小鼠H22肝癌细胞中提纯的热休克蛋白gp96(HSPgp96)对小鼠腹腔巨噬细胞(PEM(ψ))呼吸爆发的影响及其与细胞内外游离钙的关系.方法:(1)用亲和层析和离子交换层析等方法从小鼠H22肝癌细胞中获得纯化的HSPgp96.(2)用细胞内过氧化物荧光探针H2DCF-DA监测HSPgp96作用于小鼠PEM(ψ)过程中,单个细胞活性氧(ROS)信号的变化,反映PEM(ψ)内呼吸爆发时的变化过程;用荧光探针Fluo-3/AM监测HSPgp96作用于小鼠PEM(ψ)过程中,单个细胞内钙离子([Ca2+]i)信号的变化.(3)使用细胞膜和细胞内钙通道抑制剂及钙离子载体后,再观察HSPgp96作用后ROS信号的变化.结果:(1)加入HSPgp96后PEM(ψ)内Fluo-3荧光强度立即上升,70s时增幅达161.05%±50.99%;当分别阻断细胞外钙内流、抑制细胞内钙库释放功能后110s增幅分别为84.81%±29.52%和46.21%±17.24%.同时阻断胞内外钙作用,HSPgp96这一诱发功能明显被抑制.加入钙离子载体后可见细胞内荧光强度迅速增强,于110 s时达156.98%+45.83%,随后迅速下降.(2)小鼠PEM(ψ)受HSPgp96刺激后表征ROS的荧光强度立即上升,620 s达基础荧光值的636.78%±82.02%,随后始终维持在高水平.当分别阻断细胞外钙内流、抑制细胞内钙库释放功能后,再加入HSPgp96后细胞内ROS荧光值上升幅度较小.同时阻断了胞内外钙作用后,HSPgp96刺激后ROS荧光值上升没有明显高峰出现.结论:HSPgp96作用于小鼠PEM(ψ)后,促进了细胞外钙内流并使细胞内钙库释钙,这是HSPgp96诱发细胞内活性氧增加的基本机制.
关键词： 热休克蛋白糖蛋白96 活性氧 钙 巨噬细胞
