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醛固酮对UT-A1和UT-A3蛋白表达及其尿素转运活性的影响
目的 研究醛固酮对体外培养HEK293细胞及非洲爪蟾卵母细胞尿素转运子A1(UT-A1)和尿素转运子A1(UT-A3)蛋白表达及尿素转运活性的影响.方法 (1)应用Western印迹检测醛固酮对UT-A1、UT-A3总蛋白在HEK293细胞中表达的影响.(2)应用细胞表面生物素化及Western印迹检测醛固酮对UT-A1、UT-A3在非洲爪蟾卵母细胞的总蛋白及细胞膜表达的影响.(3)应用14C-尿素转运试验检测醛固酮对高表达UT-A1、UT-A3的非洲爪蟾卵母细胞尿素转运活性的影响.结果 (1)Western印迹结果显示,与对照组相比,醛固酮组UT-A1总蛋白水平下降(P＜0.01),UT-A3总蛋白水平下降(P＜0.01).(2)细胞表面生物素化结果显示,与对照组相比,醛固酮组UT-A1蛋白在细胞膜的表达水平和在总蛋白中的水平均下降(均P＜ 0.01),UT-A3蛋白在细胞膜的表达和在总蛋白中的表达水平均下降(均P＜0.01).(3)14C-尿素转运试验结果显示,与UT-A1高表达组相比,醛固酮组UT-A1尿素转运活性下降(1 min:94.32±9.044比40.68±4.274,P＜0.01,n=6;3 min:165.0±4.74比80.3±0.60,P＜0.01,n=6),与UT-A3高表达组相比,醛固酮组UT-A3尿素转运活性下降(1 min:204.6±3.12比176.7±9.1,P＜0.05,n=6;3 min:371.4± 14.9比318.8±12.0,P＜0.05,n=6).结论 醛固酮能直接下调UT-A1蛋白和UT-A3蛋白在总蛋白及膜蛋白中的表达、降低其尿素转运活性从而参与尿液的浓缩和稀释过程.
