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红细胞生成素对马兜铃酸诱导肾小管上皮细胞凋亡的保护机制研究
目的 探讨红细胞生成素(EPO)抑制马兜铃酸(AA)所诱导的肾小管上皮细胞(LLC-PK1)凋亡的作用机制.方法 以不同浓度AA(5、10、20 mg/L)刺激LLC-PK1细胞株,同时培养体系中加入不同浓度的EPO(5、10、20 U/ml),另设对照组.各组细胞培养24 h后,TUNEL法原位检测细胞凋亡情况;流式细胞仪检测凋亡细胞的比例;Western印迹检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白激酶(caspase)3、bcl-xL的蛋白表达.结果 (1)与对照组(6.09±1.84)%相比,AA 5 mg/L组TUNEL阳性细胞比例增加[(9.79±2.58)%];AA 10、20 mg/L阳性细胞比例显著增加[(37.67±8.23)%、(62.95±8.29)%],与对照组差异有统计学意义(P＜0.05).AA 10 mg/L组细胞经EPO 10、20 U/ml干预后,阳性细胞比例显著下降[(22.41±3.47)%、(14.63±2.66)%,P＜0.05];AA 20 mg/L组细胞经不同浓度EPO干预后,阳性细胞比例无显著变化.(2)与对照组相比,AA 5 mg/L组细胞caspase-3的活性表达有少量增加;AA 10 mg/L组细胞caspase-3显著增加;而AA 20 mg/L组caspase-3表达降低.与AA 10 mg/L组相比,EPO 10 U/ml和EPO 20 U/ml干预后,细胞caspase-3的表达显著降低.(3)与对照组相比,AA 5 mg/L组细胞bcl-xL的表达明显增加;AA 10 mg/L组细胞bcl-xL表达减少;AA 20 mg/L组细胞bcl-xL表达显著减少.与AA 10 mg/L组相比,EPO 5 U/ml干预后,细胞bcl-xL有所增加;EPO 10 U/ml和EPO 20 U/ml干预后,细胞bcl-xL的表达显著增加.结论 EPO可能通过促进抗凋亡蛋白bcl-xL的表达、抑制凋亡蛋白酶caspase-3的过高表达,从而抑制了AA诱导的肾小管上皮细胞的凋亡.
