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高糖通过血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1通路促进人近端肾小管上皮细胞合成纤连蛋白
目的研究血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1(SGK1)在高糖诱导人近端肾小管上皮细胞(HKC)产生纤连蛋白(FN)中的作用,探讨SGK1在糖尿病肾病(DN)肾小管间质纤维化中的作用机制.方法将带有SGK1显性激活型突变体质粒(pIRES2-EGFP-s422DSGK1 mutant,SD)和带有SGK1显性失活型突变体质粒(pIRES2-EGFP-K127NSGK1 mutant,KN)分别瞬时转染HKC;同时,设空质粒(pIRES2-EGFP,FP)转染组和未转染组(NT)为对照.分别用正常糖(NG,5.5 mmol/L D-葡萄糖)和高糖(HG,25 mmol/L D-葡萄糖)刺激8 h后,采用RT-PCR和Western印迹来观察SGK1和FN的mRNA及蛋白的表达.结果正常葡萄糖环境下转染SD和KN后,HKC合成的FN mRNA和蛋白的表达没有显著性改变.高糖环境下,转染SD的HKC与其它组比较,其SGK1mRNA表达显著性增高(P＜0.01),SGK1蛋白过度活化(P＜0.01),其FN mRNA和蛋白的表达显著增加(P＜0.01).转染KN的HKC与其它高糖组HKC比较,其活化的SGK1蛋白显著减少(P＜0.01),其合成FN mRNA和蛋白亦显著减少(P＜0.01).结论高糖诱导HKC的FN mRNA和蛋白的表达增加是依赖于SGK1的表达与活化,提示在DN中,高糖能通过SGK1介导的信号通路来诱导人近端肾小管上皮细胞过度合成FN,促进肾小管间质纤维化.
关键词： 高血糖症 肾小管 上皮细胞 纤连蛋白 血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶 -
血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶在糖尿病肾病小鼠中的表达及意义
目的探讨血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶(SGK)在糖尿病肾病(DN)早期病变中的表达及意义.方法采用链脲佐菌素(STZ)单次腹腔注射诱导小鼠DN模型,设DN组和正常对照组(NG).在DN模型4周时,检测肾小球细胞外基质(ECM)、肾重指数、24 h尿蛋白量和Ccr;RT-PCR检测DN病变早期肾皮质SGK 1、SGK 2、SGK 3及Ⅰ型胶原α2(Col Ⅰα2)、纤连蛋白(FN)和转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA表达;Western印迹检测SGK1蛋白的表达.结果与NG组相比,DN组小鼠肾重/体重、24 h尿蛋白量,ECM相对面积,Ccr均显著增加.肾皮质Col Ⅰα2、FN、TGF-β1 mRNA表达显著上调,同时SGK1 mRNA、SGK2 mRNA、SGK3 mRNA及SGK1蛋白表达显著上调.而且SGK1、SGK2、SGK3的mRNA表达与Col Ⅰα2,FN,TGF-β1 mRNA表达均有显著正相关关系.结论 SGK在DN肾脏中有较高表达,伴随有ECM积聚,与Col Ⅰα2,FN,TGF-β1 mRNA表达有显著正相关,它可能在DN早期病变中起重要作用.
关键词： 糖尿病肾病 细胞外基质 蛋白激酶类 血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶 -
高糖对人肾小管上皮细胞和系膜细胞表达血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶1的影响
目的研究高糖作用下人近端肾小管上皮细胞(HKC)和系膜细胞(HMC)中血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶1(SGK1)的表达,并初步探讨SGK1在介导高糖致肾细胞(HKC和HMC)过度合成细胞外基质(ECM)中的作用.方法将HKC和HMC细胞分别分为正常对照组(NG组,5.5mmol/L D-葡萄糖)、高糖组(HG组,25 mmol/L D-葡萄糖)和渗透浓度对照组(MG组,19.5mmol/L甘露醇和5.5 mmol/L D-葡萄糖).SGK1 mRNA水平及蛋白水平的检测分别采用RT-PCR方法和Western印迹方法.培养液中纤连蛋白(FN)水平检测采用ELISA方法.结果 HKC和HMC中均存在SGK1基因和蛋白的表达.HMC中SGK1的表达明显高于HKC(P＜0.01).高糖刺激8 h后,两种细胞SGK1表达均明显升高(P＜0.01);同时,甘露醇也上调HKC和HMC SGK1的表达(P＜0.01),但其作用明显弱于高糖(P＜0.05).FN在高糖环境下表达上调,且高峰出现时间滞后于SGK1.结论高糖能促进近端肾小管上皮细胞和系膜细胞SGK1的表达,并可能通过SGK1介导的信号转导途径在糖尿病肾病ECM积聚中发挥重要作用.
关键词： 高血糖症 纤连蛋白类 血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶 肾小管上皮细胞 系膜细胞
