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地黄饮子对Aβ诱导的SH-SY5Y细胞RAGE/p38MAPK/NF-κB信号通路的影响
目的 探讨地黄饮子对β-淀粉样蛋白1-42 (Ap 1-42)诱导的人神经母细胞瘤细胞株(SH-SY5Y)晚期糖基化终产物受体(RAGE)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)/核转录因子kappa-B(NF-κB)信号通路的影响. 方法 将雄性SD大鼠按随机数字表法分为正常组及给药组(每组20只),分别配制正常血清培养液及地黄饮子含药血清培养液.(1)将SH-SY5Y细胞分为3组,其中对照组采用正常血清培养液培养,模型组采用正常血清培养液+Aβ1-42寡聚体培养,地黄饮子组采用地黄饮子含药血清培养液+Aβ1-42寡聚体培养.采用Westem blotting检测各组SH-SY5Y细胞NF-κB p65、p38、磷酸化(p)-p38蛋白表达.(2)将SH-SY5Y细胞单独设为转染RAGE地黄饮子组,于Aβ1-42寡聚体作用不同时间(15 min、30 min、60 min、12h、24 h、48 h、72 h)时,采用Western blotting检测各时间点SH-SY5Y细胞p-p38、p38蛋白表达.(3)将SH-SY5Y细胞分为6组,其中模拟转染RAGE对照组采用正常血清培养液+空载体质粒转染培养,转染RAGE对照组采用正常血清培养液+RAGE质粒转染培养,模拟转染RAGE模型组采用正常血清培养液+Aβ1-42寡聚体+空载体质粒转染培养,转染RAGE模型组采用正常血清培养液+Ap1-42寡聚体+RAGE质粒转染培养,模拟转染RAGE地黄饮子组采用地黄饮子含药血清培养液+Aβ1-42寡聚体+空载体质粒转染培养,转染RAGE地黄饮子组培养方法同前.采用ELISA法和流式微球分析(CBA)法检测各组SH-SY5Y细胞炎症因子白介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α含量. 结果 (1)与模型组比较,地黄饮子组SH-SY5Y细胞NF-κB p65蛋白、p-p38/p38表达水平明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).(2)p-p38蛋白表达水平在Aβ1-42作用30 min时开始明显升高,持续至24 h时表达高,48 h时开始出现下调趋势.(3)模拟转染RAGE模型组和转染RAGE模型组比较,模拟转染RAGE地黄饮子组和转染RAGE地黄饮子组比较,后者IL-1β、IL-6、TNF-0α含量明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).与模拟转染RAGE模型组比较,模拟转染RAGE地黄饮子组Ⅱ-1β、IL-6、TNF-α含量明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).与转染RAGE模型组比较,转染RAGE地黄饮子组Ⅱ-1β、IL-6、TNF-α.含量明显降低,差异均有统计学意义P＜0.05). 结论 地黄饮子通过抑制Aβ1-42诱导的SH-SY5Y细胞RAGE/p38 MAPK/NF-κB信号通路,改善炎症反应,起到细胞保护作用.
