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PTEN基凶文献资料
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构建和鉴定PTEN基因的shRNA重组腺病毒表达载体
目的 构建PTEN特异性shRNA重组腺病毒表达载体.为应用基因沉默技术进行缺血性脑损伤的基因治疗奠定基础.方法 将前期构建的PTEN shRNA特异性真核表达载体pGenesil-1-shRNA的表达启动子U6连同shRNA亚克隆至穿梭质粒pAdTrack,酶切及DNA测序鉴定后,将含PTEN基因的重组穿梭质粒pAdTrack-U6-shRNA经PmeⅠ线性化后转化人pAdEasy-1感受态细菌.pAd-U6-shRNA质粒经PacⅠ线性化后转染293细胞,包装重组腺病毒Ad-U6-shRNA,并进行PCR鉴定、病毒滴度测定及Western blotting检测受感染海马神经元细胞内PTEN蛋白的表达.结果 证实pAdTrack-U6-shRNA及pAd-U6-shRNA质粒构建正确,收获病毒后PCR及DNA测序结果证明Ad-U6-shRNA包被成功,受腺病毒感染海马神经元细胞内PTEN蛋白表达明显降低.结论 成功构建了PTEN基因的shRNA重组腺病毒载体Ad-U6-shRNA,为应用基因沉默技术研究PTEN对缺血性脑损伤后的神经保护作用奠定了基础.
