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亲和磷酸蛋白组学文献资料
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亲和磷酸蛋白组学——筛选LPS信号通路中调节蛋白的新方法
目的 建立并优化亲和磷酸蛋白组学方法,发现脂多糖(LPS)刺激Thp-1巨噬细胞所诱导的磷酸化蛋白图谱的差异,以初步筛选LPS通路中的新信号分子.方法 使用佛波酯刺激Thp-1单核细胞48 h使之分化成为成熟的巨噬细胞,静息48 h后,先后以等体积的培养基或100 ng/ml LPS刺激30min.采用PMAC富集磷酸化蛋白,经超滤除盐后进行二维凝胶电泳,比较对照组和LPS组的磷酸化蛋白图谱的差异并挑选部分斑点进行质谱鉴定.结果 相对于对照组,LPS刺激的细胞(LPS组)中,29个磷酸化蛋白斑点在双向电泳图谱中表现出重复的差异.其中8个斑点发生了上调,并且新出现了7个斑点;10个发生了下调,并且消失了4个斑点.选择新出现或消失的蛋白斑点进行质谱测试,鉴定出其中4个,这些蛋白参与信号转导和宿主防御反应等,其中LPS刺激后,proteasome C2亚基的磷酸化显著上调,这与文献报道的结果相符合,证实了该方法的有效性,而Z-DNA-binding protein 1的磷酸化尚未见诸报道,需要进一步的验证和研究.结论 亲和磷酸蛋白组学方法是筛选信号分子的有效策略,可以广泛应用于信号通路的系统性研究.
