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人GPR177蛋白文献资料
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hGPR177/PCDNA3.1(+)重组质粒的构建及其在A549肺癌细胞中的表达
目的 构建hGPR 177/PCDNA3.1(+)重组质粒,并在A549肺癌细胞中表达hGPR177蛋白.方法 利用生物分析软件DNAMAN 6.0选取合适的穿梭载体PCDNA3.1(+)和酶切位点.用质粒提取试剂盒对穿梭载体PCDNA3.1(+)及含有hGPR177基因pReceive-B04质粒进行抽提,并对其进行双酶切.使用DNA连接酶把hGPR177基因与PCDNA3.1(+)酶切片段连接,重新构建hGPR177/PCDNA3.1(+)重组质粒.将重组质粒通过电转的方式转导进A549肺癌细胞.运用细胞培养技术,培养已电转hGPR177/PCDNA3.1(+)重组质粒的A549肺癌细胞.结果 利用0.8％琼脂糖凝胶电泳检测hGPR177/PCDNA3.1(+)重组质粒的质量为6 999 bp.经过机械破碎后获取细胞提取物,电泳鉴定出现GPR177蛋白带.结论 成功构建了hGPR177/PCDNA3.1(+)重组质粒,并在A549肺癌细胞表达系统中表达出人GPR177蛋白.
