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叶下珠复方Ⅱ号对肝星状细胞凋亡和miR-16/Bcl-2表达的影响
[目的]观察叶下珠复方Ⅱ号体外对肝星状细胞(HSC-T6)凋亡和miR-16/Bcl-2表达的影响,进一步探讨其抗肝纤维化的作用机制.[方法]体外培养HSC-T6细胞,分为空白对照组,叶下珠复方Ⅱ号高剂量组(3.6 g/L)、中剂量组(1.8/L)和低剂量组(0.9 g/L),采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测药物对HSC-T6细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡的变化,实时荧光定量PCR法检测药物处理后HSC-T6细胞miR-16和Bcl-2 mRNA表达的改变,Western Blot法测定Bcl-2蛋白的表达变化.[结果]叶下珠复方Ⅱ号处理HSC-T6细胞后,高、中、低各剂量组对HSC-T6细胞增殖均有明显的抑制作用,随着叶下珠复方Ⅱ号浓度的增加,细胞的凋亡率也逐渐增加;叶下珠复方Ⅱ号各处理组miR-16的表达显著增加,呈现明显的剂量—效应关系,且Bcl-2mRNA和蛋白质表达显著减少,与空白对照组比较,差异均具有统计学意义(P＜0.01).[结论]叶下珠复方Ⅱ号能显著抑制HSC-T6细胞增殖和诱导其凋亡,其作用机制与提高miR-16的表达,抑制其靶基因Bcl-2的表达有关.
关键词： 叶下珠复方Ⅱ号/药理学 肝纤维化/中药疗法 细胞凋亡 基因表达调控 细胞培养 -
叶下珠复方Ⅱ号对肝癌Huh7细胞白细胞介素-6信号通路与微小RNA let-7a网络的调控作用
[目的]研究叶下珠复方Ⅱ号对肝癌Huh7细胞白细胞介素-6(IL-6)信号通路与微小RNA let-7a网络失衡的调节作用.[方法]以不同浓度的叶下珠复方Ⅱ号体外作用于人肝癌Huh7细胞株,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测药物对人肝癌Huh7细胞增殖的影响.设空白对照组、叶下珠复方Ⅱ号高剂量组(48.0 g/L)和低剂量组(24.0g/L),采用放射免疫法检测药物作用后肝癌Huh7细胞分泌IL-6的变化；采用茎环结构的逆转录实时荧光定量PCR方法检测肝癌Huh7细胞MicroRNA let-7a和miR-21的表达变化,采用实时荧光定量PCR方法检测药物作用后IL-6、核因子-κB亚基P65(NF-κB/P65)、转录活化因子(STAT3)、蛋白激酶2(AKT2)、PTEN、K-ras、c-myc、Bcl-2基因的mRNA表达变化,采用Western blot法检测PTEN、STAT3、AKT2蛋白表达的变化.[结果]肝癌Huh7细胞经叶下珠复方Ⅱ号处理48 h,高、低剂量组Huh7细胞增殖率和上清液IL-6含量均显著下降,与空白对照组比较差异均具有统计学意义(P＜0.01).叶下珠复方Ⅱ号高、低剂量处理后microRNA let-7a表达量显著上升、miR-21的表达显著下降,与空白对照组比较差异均具有统计学意义(P＜0.01)；叶下珠复方Ⅱ号高、低剂量组与空白对照组比较,NF-κB/P65、STAT3、AKT2、K-ras、c-myc、Bcl-2基因mRNA的表达量均显著下降(P＜0.01),而PTEN mRNA的表达显著增加(P＜0.01),并呈明显的量效关系.叶下珠复方Ⅱ号高、低剂量组处理后PTEN的蛋白表达显著增加,STAT3、AKT2的蛋白表达显著减少,与空白对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).[结论]叶下珠复方Ⅱ号对人肝癌Huh7细胞增殖有明显的抑制作用,作用机制与抑制IL-6表达和IL-6/STAT3信号通路活化,调节IL-6信号通路与MicroRNA let-7a网络的失衡作用有关.
关键词： 叶下珠复方Ⅱ号/药理学 肝癌/中药疗法 信号通路 细胞培养 基因表达调控 -
叶下珠复方Ⅱ号体内抗鸭乙肝病毒的实验研究
[目的]观察叶下珠复方Ⅱ号体内抗鸭乙型肝炎病毒(DHBV)的作用.[方法]采用聚合酶链反应(PCR)法筛选DHBV-DNA阳性的先天感染鸭30只,随机分为5组:病毒对照组,叶下珠复方Ⅱ号高、中、低剂量组(剂量分别为33.6、18.6、8.4 g·kg-1·d-1)、拉米夫定组(剂量为20 nag·kg-1·d-1).各组于用药前后分别采用荧光定量PCR法检测血清DHBV-DNA含量变化.[结果]在给药第7、14、21、28天及停药后第5天叶下珠复方Ⅱ号高、中剂量组鸭血清DHBV-DNA含量显著降低,与给药前和病毒对照组比较差异均有显著性意义(P<0.05或P<0.01).[结论]叶下珠复方Ⅱ号具有一定的抑制DHBV复制作用.
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叶下珠复方Ⅱ号对小鼠实验性肝损伤的保护作用
[目的]观察叶下珠复方Ⅱ号对小鼠实验性肝损伤的保护作用.[方法]将NIH小鼠随机分成正常对照组,模型组,叶下珠复方Ⅱ号高、中、低剂量组(剂量分别为110、55、27.5g·kg-1),联苯双酯组(150mg·kg-1);以刀豆蛋白A(Con A)和D-氨基半乳糖(D-GalN)分别复制小鼠急性肝损伤模型,用叶下珠复方II号水提液进行干预治疗,并与联苯双酯进行对照,检测小鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)及肝组织超氧化物歧化酶(SOD)活性,并观察肝组织病理改变.[结果]叶下珠复方Ⅱ号可显著性降低两种实验性肝损伤小鼠血清ALT和AST活性,升高肝损伤小鼠肝组织SOD活性,与模型组比较差异有显著性意义(P＜0.01),与联苯双酯组比较差异无显著性意义(P＞0.05),且可明显减轻肝组织病理改变.[结论]叶下珠复方Ⅱ号对刀豆蛋白A和D-氨基半乳糖所致小鼠实验性肝损伤具有较好的保护作用,作用机制与抑制脂质过氧化损伤有关.
