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母源性／胎源性基因组 DNA 中的甲基化特异性鉴定及其在唐氏综合征诊断 中的 价值
目的：研究3号染色体上 RASSF1A 基因、21号染色体上的 AIRE 基因在母源性／胎源性基因组DNA 中的甲基化特异性及产前诊断价值。方法收集30例孕妇（早、中、晚孕期各10例）外周血及胎儿组织，离心分离血浆和血细胞；所有血细胞和胎儿组织基因组 DNA 样本经过甲基化修饰后进行目的基因 PCR，即同时进行3号染色体 RASSF1A、21号染色体 AIRE 基因的甲基化引物和非甲基化引物的扩增；30例血浆基因组 DNA 甲基化修饰后进行 RASSF1A、AIRE 基因的甲基化引物扩增；1例唐氏综合征胎儿和 1例正常胎儿母血浆基因组DNA 甲基化修饰后，进行 AIRE 和 RASSF1A 基因的甲基化引物扩增，电泳后的目的条带进行 Gel －pro analyzer 软件光密度值分析。结果30例胎儿组织标本和30例母血细胞标本，均提取出基因组 DNA。胎盘组织 AIRE、RASSF1A 基因甲基化引物扩增出目的条带；母血细胞 AIRE、RASSF1A 基因非甲基化引物扩增出目的条带。RASSF1A、AIRE 基因存在母源性／胎源性的甲基化差异（P ＜0．05）；此差异性不受年龄、孕产史、妊娠阶段等妊娠状态的影响（均 P ＞0．05）。在保证30例血浆标本存在基因组 DNA 的前提下，进行 AIRE、RASSF1A 基因的 MS －PCR 扩增，阳性率分别为73％、77％。通过3号染色体上 RASSF1A 基因的对比消除误差因素影响，唐氏综合征胎儿和正常胎儿母血浆游离胎儿 DNA 进行21号染色体上的 AIRE 基因浓度对比，的确存在3∶2的数量关系。结论人类3、21号染色体上存在母源性／胎源性甲基化表观遗传学差异（即母体是非甲基化的而胎儿阶段是甲基化的修饰状态），并且不受妊娠阶段、年龄和孕产史等妊娠状态的影响，是一种很好的胎儿遗传学标记；利用母源性／胎源性甲基化差异可以进行母血浆中胎儿 DNA 的鉴定，甲基化引物扩增出来的目的基因一定是胎儿基因，可以保证胎儿 DNA 的纯度和可信度；待检测标本的母血浆基因组 DNA 和正常胎儿母血浆基因组 DNA 甲基化修饰后，进行 AIRE 基因甲基化引物扩增，两者的 AIRE 基因定量对比代表着21号染色体数量之间的对比，可以作为一种无创性产前诊断唐氏综合征的确诊方法进行下一步探讨。
