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嵌合重组蛋白质文献资料
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Ag43／GFP 嵌合表达质粒的构建及其在大肠杆菌表面的表达
目的：构建大肠杆菌抗原Ag43（pETAg43′）以及Ag43和绿色荧光蛋白（GFP）（pETAg43′／GFP）的重组表达质粒，了解pETAg43′／GFP是否能够将GFP表达于细菌表面。方法用PCR扩增获得Ag43大部分基因序列（ Ag43′），同时用酶切方法从质粒pEGFP－C1切取GFP基因序列，首先将Ag43′基因序列插入表达质粒pET－22b中，获得重组质粒pETAg43′，然后再将GFP基因序列插入pETAg43′获得质粒pETAg43′／GFP。将重组质粒pETAg43′／GFP转化Ag43基因缺失的菌株JM109（△Ag43），用荧光显微镜和SDS－PAGE了解是否能将GFP表达于细菌表面，同时了解加热是否能够直接获得Ag43′／GFP的嵌合重组蛋白。结果琼脂糖凝胶电泳发现PCR扩增的Ag43′和GFP基因序列分子量大小与预期值相一致，酶切分析重组质粒pETAg43′和pETAg43′／GFP结果与预期值相符，基因测序显示质粒pETAg43′和pETAg43′／GFP的基因序列和阅读框架均准确无误。质粒pETAg43′／GFP经诱导后可以将Ag43′／GFP嵌合蛋白表达于大肠杆菌JM109（△Ag43）的表面，55℃加热50 min是提取Ag43′／GFP嵌合蛋白的佳条件。结论成功构建了能够将外源蛋白GFP表达于细菌表面的重组表达载体，在大肠杆菌表面有效表达并加热提取获得了嵌合重组蛋白Ag43′／GFP，为制备其他自身抗原分子的Ag43嵌合蛋白奠定了基础。
