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双荧光检测文献资料
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饥饿诱导人胚肾细胞自噬模型的构建
目的：探讨饥饿诱导的人胚肾细胞（HEK293）自噬模型的构建。方法采用Earle's平衡盐溶液（EBSS）分别处理 HEK293细胞0、1、2、4、8 h，显微镜下观察细胞形态变化，蛋白免疫印迹法检测自噬微管相关蛋白轻链（LC）3-Ⅱ／LC3-Ⅰ和 p62的表达；双荧光 mRFP-eGFP-LC3（pt-fLC3）质粒转染 HEK293细胞24 h 后，荧光显微镜观察 EBSS 饥饿条件下细胞内红色和绿色 LC3荧光亮点的变化。结果饥饿处理后，HEK293细胞皱缩、变小变圆，蛋白免疫印迹法可检测到 LC3的蛋白表达和 LC3-Ⅱ／LC3-Ⅰ比值增加；荧光显微镜可观察到细胞内红色和绿色 LC3荧光亮点均增加。结论饥饿可成功诱导 HEK293细胞自噬，表现为 LC3蛋白表达和 LC3-Ⅱ／LC3-Ⅰ比值的增加，以及荧光显微镜下细胞内红色和绿色 LC3荧光亮点的增加。
关键词： 饥饿 自噬 自噬微管相关蛋白轻链3 p62 双荧光检测
