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Rv0867c文献资料
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结核分枝杆菌Rv0867c基因的克隆表达及其纯化
目的 构建结核分枝杆菌Rv0867c基因的原核表达质粒,获得结核分枝杆菌Rv0867c基因的表达蛋白.方法 制备结核分枝杆菌基因组DNA,采用聚合酶链反应(PCR)技术扩增目的 基因片段;通过克隆载体pUC19构建质粒载体pUC19-Rv0867c,经序列测定证实正确,双酶切后连接于表达载体pPRO-EXHT,转化入大肠杆菌DH5α中,再经IPTG诱导表达带His标签的Rv0867c融合蛋白;用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析重组蛋白的相对分子质量大小及表达形式.结果 成功扩增出了结核分枝杆菌Rv0867c基因,构建了具有正确基因序列的表达载体pPRO-EXHT-Rv0867c,转化入大肠杆菌DH5α中,经诱导产生高水平的表达产物.经SDS分析,在80kD处出现新生蛋白带,凝胶薄层扫描检测表达量约占菌体蛋白的23.7%.该融合蛋白以包涵体的形式存在,用Ni2+-NTA纯化柱在变性条件下进行纯化.结论 成功克隆了结核分枝杆菌Rv0867c基因并得到了其大肠杆菌表达产物,为进一步研究Rv0867c基因蛋白的活性及其功能,以及结核分枝杆菌快速促生长作用奠定了基础.
