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毕赤酵母表达Q8008发酵条件的优化研究
目的:对表达巴斯德毕赤酵母的发酵条件进行优化,确定佳的发酵控制条件,以获得重组textilinin‐1(Q8008)高表达量。方法通过多因素正交实验确定 Q8008发酵培养的适发酵条件。结果表达温度在22℃,pH 值为7.0,加入甲醇量为5 g/L 时为优发酵条件,诱导表达时间为84~108 h。结论优化巴斯德毕赤酵母的发酵条件,可提高 Q8008表达量,为开发抗纤溶酶止血药应用于临床具有重要意义。
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重组textlinin-1抑制活性的性质研究
目的:对毕赤酵母表达的 textlinin-1(Q8008)进行分离纯化,并对其抑制plasmin活性的性质进行研究。方法构建表达 Q8008 pachia pastoris工程菌,经发酵、纯化得到纯度达95%以上的 Q8008。考察不同的温度、pH 缓冲液和金属离子等条件对 Q8008抑制plasmin活性的影响。结果 Q8008在中性条件下比较稳定,其适pH 值为7.0,适温度为40℃,在30~50℃相对酶活力在90.0%以上;有2个金属离子对 Q8008活性测定方法的影响产生了显著性差异,Zn2+起激活作用,Co2+起抑制作用,其余金属离子均无显著性差异。结论 Q8008在中性 pH 下抑制活性稳定;在50℃以下,受温度变化影响较小;金属离子对其抑制活性测定有一定影响。
关键词: 重组 Textlinin Q8008 酶抑制剂性质 纤溶酶抑制剂