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生细胞株文献资料
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建立巴马长寿老人经EBV转染永生细胞株的方法
目的:建立用EBV转化长寿人群外周血淋巴细胞永生细胞株(LCL)的方法.方法:用EBV转染8份百岁以上健康老人,20份89～99岁健康老人及8份66岁以下健康人的血样共36份.采用20%FBS RPMI1640培养液,配合环孢菌素A、植物血凝素(PHA),置37℃ 5%CO2培养箱内培养.结果:成功地获得24份永生细胞株(其中,百岁老人6份,89～99岁老人12份,66岁以下6份).结论:采血后24～48 h之间接种,转化成功率高.转染后2～3周,大部分标本出现细胞分裂、变形,标志着转化成功.超过5周仍无细胞分裂者即发生细胞凋亡.PHA有缓解细胞凋亡的作用,但不能使细胞分裂.污染是引起转染细胞株凋亡的主要因素.严格的无菌操作、保持培养细胞的适当密度、适时换液、打散较大的细胞克隆团是培养LCL的关键.
