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MTT法在抗结核新药细胞毒性快速筛选中的应用研究
目的 建立抗结核新药细胞毒性筛选的MTT法并应用于氯苯吩嗪衍生物IC50的测定,为新药筛选提供参数和依据.方法 取Vero和HepG2细胞,用培养液制成不同浓度的细胞悬液,96孔培养板中培养2～4 h后加入MTT作用4 h,弃去培养液,加入DMSO溶解其甲臜颗粒,在405 nm,450 nm,492 nm和630 nm波长处测定OD值,根据不同波长所测OD值的大小确定其佳检测波长.根据细胞浓度与OD值关系曲线确定其适细胞浓度.取适浓度细胞接种入96孔培养板,与经3倍系列稀释的不同浓度的化合物作用48 h后测定其OD值,计算化合物对Vero和HepG2细胞的相对抑制率,用origin7.0软件拟合量效曲线,计算各化合物的IC50.结果 MTT的佳检测波长为492 nm,适细胞接种浓度为2.5×104～4×105个/ml.所测定的131个氯苯吩嗪衍生物对Vero和HepG2细胞的IC50结果相似;其中有10个化合物的IC50大于其高试验浓度,提示其细胞毒性较小.结论 采用MTT法检测化合物对Vero细胞的增殖反应,可经济、快速地对抗结核新药的细胞毒性进行初步筛选.
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噻唑蓝和刃天青法在一线抗结核药物药敏试验中的应用
目的 评价噻唑蓝[3-(4,5-二甲基噻唑)-2,5-二苯基溴化四氮唑蓝,MTT]和刃天青(resazurin)2种快速而价廉的药敏试验方法进行一线抗结核药物的药敏试验的可行性.方法 分别用MTT和刃天青2种微孔板方法对64株结核临床分离菌株进行一线抗结核药物的药敏检测,并将结果与传统罗氏培养基的绝对浓度法的结果进行比较分析.结果 MTT和刃天青2种微孔板方法所得利福平(RFP)、异烟肼(INH)、乙胺丁醇(EMB)、链霉素(SM)4种一线抗结核药物的药敏结果与传统绝对浓度法有较好的一致性,MTT法进行RFP、INH、EMB、SM药敏试验的敏感度分别为94.8%、93.8%、92.9%、90.6%,特异度分别为96.0%、93.8%、96.0%、87.5%,准确性分别为95.3%、93.8%、95.3%、89.1%;刃天青法进行BFP、INH、EMB、SM药敏试验的敏感度分别为92.3%、90.6%、92.9%、87.5%,特异度分别为96.0%、90.6%、94.0%、87.5%,准确性分别为93.8%、90.6%、93.8%、87.5%.4种一线抗结核药物应用MTT法与绝对浓度法的Kappa值为:RFP 0.857,INH 0.831,EMB 0.714,SM 0.792;应用刃天青法与绝对浓度法的Kappa值为:RFP 0.871,INH 0.826,EMB 0.826,SM 0.750.MTT和刃天青2种药敏方法4种一线抗结核药物的Kappa值为:RFP 0.889,INH 0.875,EMB 0.787,SM 0.844.结论 MTT和刃天青是2种简单快速、价廉且敏感的药敏方法,有希望成为一线抗结核药物药敏试验的候选方法.
