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Calpain(依钙蛋白酶)-lik文献资料
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弓形虫依钙蛋白激酶Calpain-like的克隆及生物学特性
目的 克隆弓形虫RH株Calpain(依钙蛋白酶)-like基因,分析免疫生物学功能,筛选预防弓形虫感染的疫苗候选分子. 方法 利用人类、鼠类和其它寄生虫的Calpain基因同源性比较的保守区域合成混合引物,以弓形虫的RNA为模板.应用RT-PCR扩增弓形虫Calpain-like 基因片段,扩增的片段通过TA克隆插入克隆载体pET32A,筛选阳性克隆进行双酶切鉴定和DNA序列分析,用克隆的基因片段制备特异性基因探针,经Northern blot技术证实弓形虫Calpain-like基因mRNA. 结果 RT-PCR扩增了316bp弓形虫Calpmn-like基因,其DNA序列与日本血吸虫Calpain基因同一区域的同源性为70%,与计算机推测的弓形虫Calpain-like基因的同源性为100%.Northern blot显示了弓形虫Calpmn-like基因mRNA的大小约6300bp. 结论 弓形虫RH株基因组中存在Calpmn-like基因,Calpain-like基因在弓形虫RH株中高度表达.
关键词： 弓形虫 Calpain(依钙蛋白酶)-lik 基因克隆 RT-PCR
