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attacin基因文献资料
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家蝇Attacin基因在家蝇三龄幼虫中的时间表达模式研究
目的 探讨家蝇Attacin mRNA在幼虫各个时期的表达,为进一步研究家蝇的免疫防御打下基础.方法 对家蝇三龄幼虫进行诱导,分别取诱导前0 h和诱导后2 h、4 h、8 h、12 h、16 h、24 h、36 h、48 h的家蝇mRNA,进行RT-PCR,分析attacin基因在家蝇体内的时间表达模式.结果 家蝇三龄幼虫体内的attacin基因在诱导前后均有表达,诱导后表达增强16 h达到相对高水平,维持约24 h,而后开始下降.结论 Attacin基因在家蝇三龄幼虫中是组成性表达,对进一步了解其在家蝇免疫系统,丰富对昆虫天然免疫的认识具有积极作用.
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顺式串联家蝇抗菌肽Attacin基因真核表达载体的构建
目的构建家蝇抗菌肽Attacin基因多拷贝串联体,并克隆到甲醇酵母分泌表达载体pPIC9K上.方法PCR法扩增家蝇抗菌肽Attacin基因成熟肽片断,目的片断的上游5'端带有EcoRⅠ和Nhe Ⅰ位点,下游5'端带有Not Ⅰ和XbaⅠ位点,目的片断首先克隆入pMD18-T载体,利用pMD18-T载体的Nde Ⅰ位点和目的片断上的一对同尾酶(Nhe Ⅰ和Xba Ⅰ),多次酶切连接,串联成多拷贝的Attacin成熟肽基因,再用EcoRⅠ和NotⅠ双酶切,后克隆入甲醇酵母分泌表达载体pPIC9K.结果PCR鉴定、酶切鉴定和DNA测序证明串联体基因重组质粒构建成功.结论该方法能方便高效地获得所需的多拷贝基因,为进一步进行高效表达打下基础.
