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重组蛋白SAG2文献资料
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弓形虫表面抗原SAG2重组蛋白的表达及纯化
目的 在大肠埃希氏菌(E.c oli中表达弓形虫表面抗原2(SAG2),纯化制备重组蛋白rSAG2.方法 采用聚合酶链反应(PCR)技术从弓形虫基因组中扩增出SAG2编码基因片段,以pMD-18T质粒作TA克隆,序列测定后亚克隆入表达载体pGEX-4T-2,并转化E.coli JM109感受态菌,IPTG诱导表达rSAG2蛋白,重组rSAG2蛋白采用B-PER谷胱甘肽巯基转移酶(GST)融合蛋白纯化试剂盒纯化并进行SDS-PAGE与免疫印迹(Western-blot)鉴定.结果 SAG2编码基因扩增片段大小为469 bp;测序结果显示,克隆的SAG2基因序列与GenBank中弓形虫RH株的同源序列(序列号GI:161925)完全一致;所诱导表达的含GST的融合rSAG2蛋白大小约43kDa,纯化后的rSAG2经SDS-PAGE电泳显示一条纯化条带;蛋白免疫印迹结果显示rSAG2能够被兔弓形虫感染血清所识别.结论 在大肠埃希氏菌中融合表达了弓形虫SAG2重组蛋白,纯化的rSAG2蛋白具有一定的免疫活性.
