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TP0100文献资料
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梅毒螺旋体硫氧还原蛋白TP0100的原核表达和鉴定
目的 构建梅毒硫氧还原蛋白TP0100基因的原核表达载体,在大肠埃希菌中表达重组蛋白,并评价其在梅毒血清学诊断中的价值.方法 构建pET-28b-TP0100重组表达质粒,转化大肠埃希菌BL21(DE3)后诱导表达.经镍柱纯化,重组蛋白通过质谱和Western blot进行鉴定.以重组蛋白为抗原建立酶联免疫吸附试验(ELISA)间接法,并检测临床收集的梅毒血清.结果 成功构建表达载体pET-28b-TP0100,测序结果 表明质粒中的插入序列与GenBank中TP0100的基因序列相同.重组蛋白表达约占菌体总蛋白的40%,相对分子质量约为23×103.质谱和Western blot分别证实重组蛋白的酶解片段来自于TP0100蛋白,重组蛋白能与梅毒TPPA阳性血清发生特异性反应.ELISA检测20份梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)阳性血清和20份TPPA阴性血清,与TPPA方法 的符合率分别为95%(19/20)和100%(20/20).结论 重组硫氧还原蛋白TP0100能够与梅毒患者阳性血清发生特异性反应,是一个潜在的梅毒血清学诊断抗原.
