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白及醇提物中5种主要活性成分的在体肠吸收特征研究
目的:考察白及醇提物中主要活性成分4-(葡萄糖氧基)-肉桂酸葡萄糖氧基苄酯(A1)、2-异丁基苹果酸(A2)、1,4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯(A3)、二氢菲1(A4)、1,4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯-2-(4-O-肉桂酰基-6-O-乙酰基)葡萄糖苷(A5)在大鼠肠道中的吸收动力学特征.方法:以葛根素为内标,采用超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)检测肠循环液中A1～A5的质量浓度.色谱柱为Acquity UPLC BEH C18,流动相为乙腈(含0.1％甲酸)-水(含0.1％甲酸)(梯度洗脱),流速为0.35 mL/min,柱温为45℃,进样量为3μL;采用电喷雾离子源,以多反应监测模式进行正、负离子扫描,用于定量分析的离子对分别为m/z 593.2→431.1(A1)、m/z 189.0→129.0(A2)、m/z 725.3→457.2(A3)、m/z 347.1→332.1(A4)、m/z 1059.3→793.1(A5)、m/z 417.0→267.0(内标).采用大鼠在体肠循环灌流模型,以累计吸收转化率(A)和吸收转化速率常数(Ka)为指标,考察不同剂量白及醇提物(低、中、高剂量分别为166、333、667μg/mL)、胆汁、P-糖蛋白(P-gp)抑制剂(维拉帕米)、不同肠段对上述5种成分肠吸收的影响.结果:A1、A2、A3、A4、A5检测质量浓度的线性范围分别为0.22～14.00、0.34～21.75、1.99～127.16、0.15～9.75、0.16～10.00μg/mL(r>0.99),定量下限分别为0.22、0.34、1.99、0.15、0.16μg/mL,低检测限分别为0.028、0.085、0.251、0.035、0.010μg/mL,日内、日间RSD均小于10％,方法回收率为83.60％～106.91％,基质效应不影响待测物的测定.白及醇提物低、中剂量组A1的A、Ka值均显著高于高剂量组,低剂量组A3的A值显著高于中、高剂量组(P<0.05或P<0.01).不结扎组A1、A3的A、Ka值均显著低于对照组,而A4的A、Ka值均显著高于对照组(P<0.05或P<0.01);P-gp抑制剂组A1、A3的A、Ka值均显著低于对照组(P<0.05或P<0.01).空肠组、回肠组、结肠组A1的A值以及结肠组A1的Ka值,结肠组A2的A、Ka值,回肠组A3的A值,回肠组、结肠组A4的A、Ka值,空肠组、回肠组A5的A值以及空肠组A5的Ka值均显著低于十二指肠组;而空肠组、回肠组、结肠组A3的Ka值均显著高于十二指肠组(P<0.05或P<0.01).结论:本研究建立的UPLC-MS/MS法专属性强、灵敏度高、操作简便,可用于A1～A5的定量分析及药动学研究.白及醇提物中5种活性成分均为全肠道吸收,且吸收肠段各有不同;A1、A3在肠道中的吸收较多,可能已达饱和;胆汁可抑制A1、A2的肠吸收,但可促进A4的肠吸收;A1～A5可能均不是P-gp的底物.
