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  • 包含CDR1在内的小鼠TREM-1分子保守区基因的克隆和原核表达

    作者:朱江;刘友生;段光杰

    目的 为研究包含CDRl在内的小鼠TREM-1分子保守区功能及TREM一1分子的活化方式奠定基础.方法 从正常成年昆明小鼠组织中提取细胞基因组DNA,利用PCR技术扩增出包含CDR1在内的小鼠TREM-1分子保守区基因片断.构建PET-30a(+)-CDR1原核表达载体,并转化到BL21(DE3)plysS大肠杆茵中通过IPTG诱导表达,将表达产物进行Tricine-SDS-PAGE电泳分析和Western blot检测分析.结果 从小鼠组织中成功获得包含CDR1在内的小鼠TREM-1分子保守区的目的基因片断并定向克隆到原核表达栽体中.克隆菌表达的蛋白电泳分析见一新的条带,相对分子质量在1.0X 104左右,Westen Blot检测显示其有与Anti-His单克隆抗体特异性结合的能力.结论 成功构建了包含CDR1在内的小鼠TREM-1保守区基因的原核表达载体,并在BL21(DE3)plysS大肠杆茵中稳定大量表达.

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