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AFLP分子标记技术及其在药用植物研究中的应用
扩增片段长度多态性(Amplified Fragment Length Polymorphism,AFLP)是一种在PCR技术和RFLP标记技术基础上发明的新的分子标记技术.本文简述了AFLP分子标记技术的原理和特点,综述了其在药用植物遗传连锁图谱的构建、遗传多样性研究、种质资源鉴定等方面的应用情况,并对其发展前景进行了展望.
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伤寒沙门氏菌扩增片断长度多态性——银染体系的建立
目的 建立伤寒沙门氏菌AFLP-银染体系.方法 对EcoRⅠ和MseⅠ两种限制性内切酶用量、酶切时间、连接产物及预扩增产物的稀释倍数等进行研究.结果 建立了伤寒沙门氏菌AFLP-银染体系:在20μl的酶切体系中,含基因组DNA 250ng,EcoRⅠ和MseⅠ各2.5U,37℃下酶切3h;21℃连接过夜;连接产物稀释10倍后进行预扩增;预扩增产物稀释50倍后再进行选择性扩增;选择性扩增完成后加等量Loading buffer,90℃变性3 min,立即冰浴;在6%变性聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳分析;银染法检测PCR产物.结论 AFLP-银染体系有望在伤寒沙门氏菌的多态性研究和流行病学调查中发挥重要作用.
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川芎简单序列重复间区多态性和扩增片段长度多态性分子标记技术多态性比较研究
目的 寻找川芎的高效分子标记.方法 以四川崇州、都江堰、新都3个产地的川芎为材料,应用100 条简单序列重复间区多态性(ISSR)引物、64对扩增片段长度多态性(AFLP)引物对30个川芎个体进行多态性筛选.结果 筛选到简单序列重复间区多态性特异性引物共10 条,扩增片段长度多态性特异性引物共6对;分别扩增出106和256条条带,多态条带百分率分别为22.64%和 22.27%.平均标记指数AFLP 的检测效率(1.78)明显高于ISSR(0.42).两种标记基于遗传相似值聚类分析结果存在着一定的差异,但用Mantel测试对两种方法检测的遗传一致度进行相关性分析表明,它们之间存在着显著的相关性( r=0.6975,p=0.014).结论 川芎具有较低的遗传多样性,AFLP更有效于ISSR.
关键词： 川芎 简单序列重复间区多态性 扩增片段长度多态性 -
天麻AFlP银染法显带研究
以天麻为实验材料,对AFLP指纹银染技术及实验操作中的关键技巧做了比较详尽的叙述,取得了比较理想的实验结果.
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黄芩群体不同形态变异类型遗传多样性的AFLP分析
目的 研究黄芩群体形态变异类型的遗传多样性.方法 采用扩增片段长度多态性(AFLP)技术,对人工栽培群体的8个形态变异类型黄芩进行多态性分析.结果 通过筛选得到9对AFLP引物组合,共扩增出2 834个DNA条带,多态性条带为1 332个,多态性位点平均为47.8%.聚类分析结果表明,8个形态变异类型黄芩划分为4类.其中,绿茎、小叶、少分枝和紫色花类型与普通类型各自聚为一类,绿茎、大叶、少分枝和淡紫色花类型与紫红茎、大叶、少分枝和紫色花类型聚为一类,绿茎、小叶、多分枝和淡紫色花类型,绿茎、大叶、多分枝和紫色花类型,绿茎、小叶、多分枝和淡紫色花类型与紫红茎、小叶、多分枝和紫色花类型聚为一类.结论 人工栽培群体黄芩形态变异类型间存在较高多态性,遗传多样性较丰富.
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DNA小卫星多态性用于异基因骨髓移植植入状态分析
近年来异基因骨髓移植已成为治疗顽固性血液疾病和血液恶性肿瘤的有效措施.提供移植后异基因植入状态的有效和客观的实验室分析指标,直接影响着患者的预后和临床的诊治.笔者选用人类基因组具有高度多态性DNA小卫星D1S80、P33.6、ApoB'位点对异基因骨髓移植进行扩增片段长度多态性分析(amplyfication fragment length polymorphism,Amp-FLP),现将结果报道如下.
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甘肃省半夏种质资源遗传多样性分析
运用荧光标记引物的扩增片段长度多态性(AFLP)分子标记技术,对50份甘肃半夏样品进行了DNA指纹图谱构建和遗传差异分析.选出的8对AFLP引物共扩增出517条带,其中396条具有多态性,多态性位点百分率为75.8%,平均每对引物扩增出64.6条带和49.5个多态性条带.系统聚类分析结果表明所有半夏AFLP指纹均不相同,来源地相同的半夏表现出相对密切的亲缘关系,甘肃省西和县的半夏同天水市的半夏遗传差异明显.聚类分析结果获得了Bootstrap校验的支持.甘肃省半夏遗传多样性十分丰富,AFLP分子标记可有效应用于半夏种质资源鉴别和遗传多样性分析.
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应用AFLP检测大麻遗传多样性
目的 筛选对于大麻多态性好的AFLP引物标记来区分大麻品种.方法 利用AFLP技术用55对引物组合对12个大麻地域品种进行初筛.结果 选出5对多态性好的引物组合进行了遗传多样性研究.每对AFLP引物组合扩增出47～76务带.共获得285条带,其中多态性条带为99条以及10条品种特异带.结论 AFLP对于大麻具有很高的分辨率,为今后深入地研究大麻植物遗传多样性奠定了很好的基础.
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利用荧光AFLP技术检测罂粟DNA多态性
目的 利用荧光AFLP检测技术检测罂粟植物DNA多态性.方法用Axygen公司的AxyPrepDNA试剂盒提取了12株产于缅甸和中国云南省昆明市宜良县罂粟植株的DNA.用Eco RI和Mse I对总DNA进行酶切,连接人工接头,预扩增和选择性扩增,其产物在CEQ8000遗传分析系统上检测.结果 64对选择性扩增引物中8对引物能得到20条以上的扩增片断.具有高度多态性.结论荧光AFLP技术可用于罂粟DNA多态性的检测.
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AFLP分子标记技术的新进展及其在法医植物学中的应用
扩增片段长度多态性(amplified fragment length polymorphism,AFLP)是一种用来检测基因组多态性的新一代分子标记,具有分辨率高、稳定性好、重复性好等特点.近年来,研究人员对该技术进行了不断的优化和完善,并由之衍生出多种相关技术.AFLP技术在动物、植物及微生物等许多研究领域已有广泛应用,在法医植物学中得到初步发展并成为研究热点.本文主要介绍了AFLP技术的新进展以及在法医植物学中的应用情况.
