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人S100A2-GST融合蛋白文献资料
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人S100A2-GST融合蛋白原核表达和纯化
目的:制备人S100A2-GST融合蛋白(Human S100A2-GST fusion protein,hS100A2-GST),为进一步研究人hS100A2蛋白的功能及其与其它因子或系统的相互作用奠定基础.方法:从pHAHA-hS100A2中双酶切获取hS100A2基因,亚克隆至原核表达载体pGST-moluc,构建pGST-moluc-hS100A2,转化BL21后酶切鉴定,IPTG诱导重组菌表达融合蛋白hS100A2-GST,再经过Glutathion-Sepharose 4B球珠分离纯化、SDS-PAGE及Western Blot鉴定,Bradford法蛋白定量.结果:Xho Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切该重组质粒后获得2个片段,分别约300 bp和5 kb,提示pGST-moluc-hS100A2构建正确;重组菌株经过IPTG诱导后,表达分子量约为36 kD的蛋白,产率达5 mg/L菌液;Glutathion-Scpharose 4B球珠纯化后,该融和蛋白纯度达92%;Western Blot显示该蛋白可以被S100A2的抗体特异识别,证实其为hS100A2-GST融合蛋白.结论:成功构建了hS100A2-GST原核表达质粒pGST-moluc-hS100A2;该质粒可在大肠杆菌中诱导表达hS100A2-GST融合蛋白,产率高;应用Glutathion-Sepharose 4B球珠可获得纯度达92%的该蛋白.为后续有关hS100A2的研究打下了基础.
关键词： 人S100A2-GST融合蛋白 诱导表达 蛋白纯化 蛋白鉴定
