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c-Ski癌基因对肿瘤相关成纤维细胞活化的影响
目的:研究癌基因c-Ski对乳腺癌相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)活化的影响.方法:应用基因重组技术,将c-Ski基因克隆到载体pBABE-puro,转染至永生化的正常乳腺成纤维细胞(normal fibroblasts,NFs),嘌呤霉素药物筛选稳定转染细胞株;Western blot检测转染后c-Ski、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和成纤维细胞活化蛋白(fibroblast activation protein,FAP)的表达;通过MTT法、流式细胞术、细胞划痕实验及Transwell细胞侵袭实验研究转染前、后成纤维细胞增殖、迁移、侵袭能力的差异;收集细胞上清制备条件培养基,用Transwell细胞侵袭实验分析转染后成纤维细胞对MD-MB-231细胞侵袭能力的影响.结果:成功构建重组质粒pBABE-puro-Ski; Western blot检测结果显示,pBABE-puro-Ski转染组细胞中c-Ski、α-SMA和FAP表达明显高于空白对照组细胞(P=0.000,P=-0.001,P=0.002);MTT法结果显示转染组细胞增殖能力高于空白对照组细胞(P=0.011);转染组细胞的S期含量(38.58±1.28)明显高于空载体组(25.05±0.52)和空白对照组(26.01±0.86),差异具有统计学意义(P=0.000);细胞划痕实验及Transwell细胞侵袭实验结果表明转染组细胞的迁移、侵袭能力均高于空载体组和空白对照组细胞;转染组细胞条件培养基能明显促进MD-MB-231细胞的侵袭能力.结论:c-Ski癌基因表达上调能促进NFs活化为CAFs,并进一步促进乳腺癌细胞MD-MB-231的侵袭能力.
